[发明专利]Galectin-3抗原表位肽、抗原、抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒

说明书

本发明涉及Galectin‑3抗原表位肽、抗原、抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒。本发明是以NTKLDNNWGREERQS或NTKLDNNWGREERQSVFPF为抗原表位肽，人工合成抗原表位肽并与载体蛋白偶联；并以此作为免疫原免疫BALB/c小鼠，采用细胞融合技术、间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，最终获得能稳定分泌鼠抗人Galectin‑3单克隆抗体的杂交瘤细胞株C6C10，保藏编号为CCTCC NO:C2020135；通过动物体内诱生制备单抗，并采用免疫组化鉴定抗体特异性。本发明提供的鼠抗人Galectin‑3单克隆抗体具有更好的特异性和灵敏度，可以用于制备Galectin‑3体外免疫检测试剂或试剂盒，从而解决现有Galectin‑3抗体存在的选择性不强、价格昂贵等缺陷。

技术领域

本发明涉及Galectin-3抗原表位肽、抗原、抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒，属于免疫学技术领域。

背景技术

人类半乳糖凝集素3(Galectin-3)基因位于染色体14q21～22，由6个外显子和5个内含子组成，Galectin-3主要定位在细胞质，也表达于细胞核、细胞表面和细胞外，通过与其相应配体相互作用发挥多种效应。Galectin-3可与糖基化的细胞外基质蛋白和膜蛋白以凝集素-糖化合物相互作用的方式结合。

Galectin-3是β-半乳糖苷动物凝集素家族成员之一，也是存在于多种生物体内的内源性凝集素，主要表达于上皮细胞、免疫细胞和巨噬细胞中，不仅参与细胞的增殖、黏附、分化、迁移、凋亡和炎症反应等过程，而且在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着重要的作用。

Galectin-3作为一种强大的促炎症因子，可以促使单核细胞向巨噬细胞的分化及其在血管内膜损害部位的聚集，激发炎症因子如白细胞介素-6、肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1等的释放。癌症检测过程中，其在卵巢癌、食管癌和肝癌中具有高表达水平，并加速刺激肿瘤细胞的增殖和侵袭。

目前，Galectin-3常用的体外免疫检测方法为免疫组织化学(IHC)法，在IHC法检测离体组织细胞中Galectin-3表达情况过程中起到关键作用的是特异性结合人Galectin-3的单克隆抗体，其特异性和亲和力决定了检测方法的灵敏度和特异性。而现有Galectin-3体外免疫检测抗体种类较少、灵敏度有待提高且价格昂贵。

发明内容

本发明的目的是提供一种Galectin-3抗原表位肽，由该抗原表位肽与载体蛋白偶联制备的抗原，可以用来免疫动物获得针对该抗原表位肽的单克隆抗体或多克隆抗体。

其次，本发明提供了由上述抗原为免疫原制备获得的Galectin-3单克隆抗体或多克隆抗体。

同时，本发明提供了能够稳定分泌鼠抗人Galectin-3单克隆抗体的杂交瘤细胞株及利用该杂交瘤细胞株制备Galectin-3单克隆抗体的方法。

再次，本发明提供了上述Galectin-3抗体在制备Galectin-3体外免疫检测试剂或试剂盒中的应用。

最后，本发明提供了一种Galectin-3免疫组化检测试剂及试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明第一方面采用一种Galectin-3抗原表位肽，根据Uniprot公布的P17931蛋白序列，选择以氨基酸序列第174-188位，即SEQ ID NO：1为抗原表位肽，或在其C端增加四个氨基酸，依次为：VFPF，即SEQ ID NO：2为抗原表位肽，所述抗原表位肽的氨基酸序列如：1)NTKLDNNWGREERQS(SEQ ID NO：1)或2)NTKLDNNWGREERQSVFPF(SEQ ID NO：2)所示。

本发明第二方面提供一种Galectin-3抗原，是将上述Galectin-3抗原表位肽与载体蛋白偶联而成。