[发明专利]一种抗氧化嵌合型抗原受体和免疫细胞

权利要求书

1.一种抗氧化嵌合型抗原受体，其特征在于，包括胞外区，所述胞外区包括间隔区，所述间隔区的核心铰链区氨基酸序列为Core Hinge-Y1：CDKTYTCPPCP(SEQ ID NO：3)或CoreHinge-Y2：CDKTSTCPPCP(SEQ ID NO：4)。

2.根据权利要求1所述的嵌合型抗原受体，其特征在于，还包括跨膜区和胞内区，所述胞外区还包括单链抗体，所述间隔区两端连接所述跨膜区和单链抗体，所述跨膜区与所述胞内区连接，所述间隔区为免疫球蛋白G的常链片段。

3.根据权利要求1所述的嵌合型抗原受体，其特征在于，所述间隔区的基因序列为IgGHCH3-Y1 cDNA(SEQ ID NO：6)或IgG HCH3-Y2 cDNA(SEQ ID NO：7)。

4.一种表达权利要求1-3任一项所述嵌合型抗原受体的免疫细胞。

5.根据权利要求4所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞包括CAR-T细胞、CAR-NK细胞、CAR-B细胞或CAR-MP细胞。

6.根据权利要求4所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞应用于杀伤肿瘤细胞。

7.根据权利要求6所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞应用于杀伤实体瘤细胞或血液肿瘤细胞。

8.根据权利要求4所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞的制备方法包括：

合成嵌合型抗原受体的cDNA；

用所述cDNA制备慢病毒质粒；

通过慢病毒质粒制备慢病毒颗粒；

获取单个核细胞，并进行预培养；

将慢病毒颗粒转染到预培养后的单个核细胞中，经过培养，获取免疫细胞。

9.根据权利要求8所述的嵌合型抗原受体，其特征在于，所述慢病毒颗粒的制备方法包括：

使用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养6x10⁶个HEK293T细胞；

第二天细胞达到聚合度80％左右时，换无10％FBS以及无抗生素的培养液后，稳定2-3小时；

所述慢病毒质粒包括pCCL-CAR质粒，分别取终浓度为6.9μg/ml的pCCL-CAR质粒、3.4μg/ml的pMDLg-pRRE质粒、2μg/ml的pMD2.G质粒、1.71μg/ml的pRSV-Rev质粒加入到培养液中，混匀得到质粒培养液；

取35μg浓度为1μg/μl的聚乙烯亚胺加入1毫升DMEM培养液中，混匀得到聚乙烯亚胺培养液；

将聚乙烯亚胺培养加入到质料培养中，混匀后，室温静置20分钟，获得第一转染液；

将所述第一转染液加入到稳定后的HEK293T细胞中，进行转染；

转染4小时后，培养液更换为含10％胎牛血清的DMEM培养液；

继续培养48小时后，收集细胞培养液，0.22μm的滤膜过滤；

滤出液经26000rpm、4℃离心2小时，取沉淀；

用XVivo15全培养液重悬所述沉淀，获得慢病毒颗粒。

10.根据权利要求8所述的嵌合型抗原受体，其特征在于，获取免疫细胞的方法包括：

取50ml外周血，Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心获得单个核细胞；

所述单个核细胞以2x10⁶/ml的细胞密度，在X-VIVO 15全培养液、37℃、5％CO₂培养2小时，收集悬浮细胞；

悬浮细胞以1.2x10⁶/ml的细胞密度接种到培养瓶内，以细胞比磁珠为1:3的比例加入CD3/CD28磁珠，并加入终浓度100U/ml的白介素2培养过夜；

加入所述慢病毒颗粒进行转染；

细胞转染后继续培养5天，通过磁力架去除磁珠，获得免疫细胞。