[发明专利]一种核酸提取方法和提取试剂盒

说明书

本发明公开了一种核酸提取方法，所述方法包括：取待测样品，加入细胞裂解液混匀，室温放置使得固液分离，获得上清液，所述上清液即为提取的核酸；所述待测样与所述细胞裂解液的体积比为4：4～6；所述裂解液的配方为：60～70mM，pH 8～9的Tris‑HCl、15～18mM硫酸铵、5～8mM MgCl₂.6H₂O、5～8μM EDTA、1～2μM SDS和40～60μg/ml蛋白酶K。本发明还提供了一种核酸提取试剂盒，所述试剂盒包括所述裂解液。本发明的核酸提取方法整个提取过程只有10分钟，上清液可直接用于后续目的基因检测，大大缩短了提取时间，简化了实验步骤，实现了核酸提取无损耗，无污染的目标。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种核酸提取方法和提取试剂盒。

背景技术

目前，核酸检测由于其灵敏度高、特异性强、操作简便、所需时间短等特点，已广泛应用于临床医学、检验检疫等多个领域，尤其是PCR、等温扩增等核酸扩增技术。然而，核酸扩增技术对于临床或直接获得的标本中的干扰物质较为敏感，会造成检测结果的假阴性，故在核酸扩增前需进行样品核酸提取与纯化。但一直以来，样本中核酸的提取和纯化是整个实验中最耗时，最繁琐的过程，严重影响样本检测的速度以及现场应用。迄今为止，核酸提取方法主要有煮沸法、离心柱法以及磁珠法。煮沸法提取时需要多次换管离心等步聚，样本处理时间长，且仍存在少量抑制扩增物质，对后续扩增会有抑制效应；离心柱法提取效果较好，但步骤繁多，且该过程中存在核酸容易丢失或污染的不足；磁珠法提取步骤简单，回收率高，易于自动化提取，但产品价格十分昂贵。

综上所述，目前的核酸提取方法存在样本需求量大，时间长，提取效果差等问题。因此，如何开发一种提取效率高的核酸提取方法和提取试剂盒，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明目的是提供一种裂解液、核酸提取试剂盒，整个提取过程只有10分钟，上清液可以直接用于后续目的基因检测，大大缩短了提取时间，简化了实验步骤。实现了核酸提取无损耗，无污染的目标。

为了实现上述目的，本发明目的之一在于提供了一种核酸提取方法，所述方法包括：取待测样品，加入细胞裂解液混匀，室温放置使得固液分离，获得上清液，所述上清液即为提取的核酸；

所述待测样与所述细胞裂解液的体积比为4：4～6；

所述裂解液的配方为：60～70mM，pH值为8～9的Tris-HCl、15～18mM硫酸铵、5～8mM MgCl₂.6H₂O、5～8μM EDTA、1～2μM SDS和40～60μg/ml蛋白酶K。

进一步地，所述裂解液的配方为：67mM，pH值为8.5的Tris-HCl、16.6mM硫酸铵、MgCl₂.6H₂O 6.7mM、6.7μM EDTA、1.7μM SDS和50μg/ml蛋白酶K。

进一步地，所述待测样与所述细胞裂解液的体积比为4：5。

进一步地，所述加入裂解液混匀采用上下颠倒混匀的方式。

进一步地，所述室温放置时间为8～12min。

本发明还提供了一种核酸提取试剂盒，所述试剂盒包括裂解液，所述裂解液的配方为：60～70mM，pH值为8～9的Tris-HCl、15～18mM硫酸铵、5～8mM MgCl₂.6H₂O、5～8μMEDTA、1～2μM SDS和40～60μg/ml蛋白酶K。

本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：