[发明专利]保持维生素D水溶液稳定的组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种保持维生素D水溶液稳定的组合物，其特征在于，包括以下组分：光稳定剂、缓冲液、蛋白类物质、防腐剂以及盐类，并进一步提供了其制备方法以及在制备维生素D校准品和质控品中的用途；本发明所述的组合物，能够显著保持维生素D水溶液稳定，制备工艺简单，利于实施和工业化生产，具有良好的市场应用前景。

技术领域

本发明涉及生物体外诊断技术，具体涉及保持维生素D溶液稳定的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

维生素D是人体必需的一类脂溶性类固醇激素，具有增加肠钙吸收、保持钙磷平衡、促进骨代谢、抑制PTH分泌等调控骨钙代谢功能，人类每天必需从食物中摄取适量的维生素D，才能维持正常的发育和健康。人体内的维生素D主要来源于皮肤中的7-脱氢胆固醇经紫外线照射转变成维生素D₃，此外还包括从鱼、肉等食物中摄取的维生素D₃和膳食补充剂中的维生素D₂。无论哪种形式的维生素D，在血液中均与结合蛋白结合后运输至肝脏，在肝脏中被转换成为25-羟基维生素D，而后在肾脏中被转化为1,25-双羟基维生素D，这是维生素D发挥作用的生物活性成分。但循环中的1,25-双羟基维生素D含量极少，而循环中的25-羟基维生素D含量是1,25-双羟基维生素D的1000倍，是维生素D在循环中的主要存在形式，能够反映人体维生素D的真实水平，是反映个体维生素D状态的最佳指标。

维生素D主要有D₂和D₃两种形式，两者结构十分相似，只是侧链有差别，维生素D₂的侧链上多一个甲基，而维生素D₃的侧链上多一个甲基和双键。维生素D是无色晶体，溶于脂肪，脂溶剂及有机溶媒中，化学性质稳定，在中性和碱性溶液中耐热，不易被氧化，但维生素D及其代谢产物不溶于水，易溶于乙醇，且化学性质不稳定，容易在光照和湿热条件下发生分解而失去活性。因此，维生素D一般应存于无光，无酸，无氧或氮气的低温环境中。

目前已有可供临床检测使用的商品化试剂盒，多采用化学发光法(CLIA)和乳增强免疫比浊法(PETIA)。化学发光法和乳增强免疫比浊法具有反应时间短、灵敏度高、特异性好、线性范围宽、重复性好等优点。然而作为检测试剂盒的重要组成的校准品往往会因为均匀性和溶解度较差，对光敏感稳定性不好，从而导致稳定性差，影响检测结果。因此，我们亟需一种能完全溶解维生素D的含有紫外线光稳定剂的水溶性溶液，用来制备检测维生素D的校准品。

发明内容

为克服现有技术缺陷，本发明提供了以下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种保持维生素D水溶液稳定的组合物，包括以下组分：光稳定剂、缓冲液、蛋白类物质、防腐剂以及盐类稳定剂；

进一步的，所述的光稳定剂为六甲基磷酰三胺(即HEMPA)，其在所述组合物中的浓度为0.5～1.0g/L；优选的，其在所述组合物中的浓度为0.8g/L；

进一步的，所述缓冲液选自三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液(即Tris-HCl缓冲液)、磷酸缓冲盐溶液(即PBS缓冲液)、2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液(即MES缓冲液)、羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液(即HEPES缓冲液)、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸缓冲液(即TAPS缓冲液)、3-(N-吗啉基)丙磺酸(即MOPS缓冲液)中的一种或几种，其在组合物中的浓度为10～100mmol/L；优选的，其在组合物中的浓度为50mmol/L；进一步优选的，所述缓冲液为三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液(即Tris-HCl缓冲液)，其pH为7.2～7.8；

进一步的，所述蛋白类物质选自牛血清白蛋白(即BSA)、人血清白蛋白(即HSA)、酪蛋白(即CS)，免疫球蛋白(即Ig)中的一种或多种，其在所述组合物中的浓度为5.0～20g/L；优选的，其在所述组合物中的浓度为10g/L；进一步优选的，所述蛋白类物质为BSA；