[发明专利]使用RNA引导的FokI核酸酶(RFN)提高RNA引导的基因组编辑的特异性在审
| 申请号： | 202010996829.7 | 申请日： | 2014-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN112301024A | 公开（公告）日： | 2021-02-02 |
| 发明（设计）人： | J.K.乔昂格;S.特赛 | 申请（专利权）人： | 通用医疗公司 |
| 主分类号： | C12N9/96 | 分类号： | C12N9/96;C12N9/22;C12N15/62;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人： | 凃滔;张文辉 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 使用 rna 引导 foki 核酸酶 rfn 提高 基因组 编辑 特异性 | ||
【权利要求书】：
1.一种RNA引导的FokI核酸酶(RFN)融合蛋白，其包含与无催化活性的CRISPR相关9(dCas9)的氨基末端融合的FokI催化结构域序列和将所述RFN导向两个靶基因组序列的引导RNA(gRNA)。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其包含2-30个氨基酸的间插接头。
3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其中所述接头包含Gly4Ser。
4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述FokI催化结构域包含SEQ ID NO:4的氨基酸388-583或408-583。
5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述dCas9在D10、E762、H983或D986处；和在H840或N863处包含突变。
6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中所述dCas9在如下位置处包含突变：
(i)D10A或D10N；和
(ii)H840A、H840Y或H840N。
7.一种核酸，其编码权利要求1-6的融合蛋白。
8.一种载体，其包含权利要求7的核酸。
9.一种宿主细胞，其表达权利要求1-6的融合蛋白。
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