[发明专利]同时检测人MTHFR和MTRR基因的试剂盒

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及同时检测人MTHFR和MTRR基因的试剂盒。本发明提供的引物具有良好的特异性，而提供的试剂盒在一次检测中可同时获得C677T、A1298C和A66G三个位点的检测结果，节省样本制备，避免手工操作及二次重复检测，极大地提高了检测效率；通过添加PCR保护剂Tween20和甘油，有效防止双功能DNA聚合酶的变性，提高酶稳定性及活性，实现扩增试剂的2‑8℃长期稳定保存；通过添加增强剂PEG6000，功能性降低DNA的熔点及解链温度，降低非特异性扩增，提高扩增效率，实现50min内完成样本的检测。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及同时检测人MTHFR和MTRR基因的试剂盒。

背景技术

叶酸在体内代谢过程中的关键酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C和蛋氨酸合成还原酶(MTRR)A66G三个位点的突变频率存在个体差异，每个人对叶酸的利用能力不同。MTHFR C677T位点突变将使MTHFR蛋白酶活性区域的丙氨酸转变为缬氨酸，从而引起酶活性的改变，其中杂合子的酶活性降至65％，纯合子则降至30％；A1298C是MTHFR基因的另一个多态性位点，该突变将谷氨酸转变为丙氨酸，杂合子的酶活性将降至83％，纯合子将降至61％。MTRR是一种黄素蛋白相关的酶，能够维持甲硫氨酸合成酶的活性状态，对维持体内甲硫氨酸循环具有重要的调节作用，该酶编码基因的A66G多态性将导致蛋氨酸被异亮氨酸替代，使酶的活性显著降低，导致甲硫氨酸合成酶活性降低，体内同型半胱氨酸堆积，浓度升高可导致一系列血管内皮损害，孕早期可导致胎儿畸形和流产，中晚孕期可能导致一些妊娠并发症，如早产，妊娠期高血压疾病，妊娠期糖尿病等。不同的患者MTHFR和MTRR基因型可能不同，对药物的响应也不同，因此对MTHFR和MTRR基因型的鉴别尤为重要，可以预判个体对叶酸的代谢能力，从而辅助临床对需要外源性补充叶酸的患者进行个体化方案的制定。

目前，MTHFR和MTRR基因多态性检测主要从DNA分子水平进行检测，包括基因芯片法、酶切法、毛细管电泳法、焦磷酸测序法，这些方法因为操作繁琐，耗时较长或假阳性概率高，而逐步被荧光探针法代替。而市面上主流厂家如武汉友芝友、苏州旷远等虽采用荧光法，但都是MTHFR(C677T)单位点、检测不全面，且不能实现自动化。因此，研究开发一种快速检测人MTHFR和MTRR基因的试剂盒是目前急待解决的新课题。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供同时检测人MTHFR和MTRR基因的试剂盒，该试剂盒能够准确、快速的对C677T、A1298C和A66G位点进行检测，且试剂稳定性高，2～8℃保存1年仍可对样品准确检测。

本发明提供了检测MTRR基因A66G位点基因型的引物探针组合，其包括：MTRR基因A66G位点野生型引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

MTRR基因A66G位点突变型引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

MTRR基因A66G位点公用引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

MTRR基因A66G位点探针，其核苷酸序列如SEQ ID No.10所示。

本发明还提供了检测MTHFR基因C677T位点基因型的引物探针组合，其包括：

MTHFR基因C677T位点野生型引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示

MTHFR基因C677T位点突变型引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；

MTHFR基因C677T位点公用引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

MTHFR基因C677T位点探针，其核苷酸序列如SEQ ID No.11所示。