[发明专利]HCV重组抗原及其突变体

说明书

本发明涉及HCV重组抗原及其突变体。本发明提供一种HCV重组抗原，其包含至少1个NS3抗原，其中所述NS3抗原在HCV氨基酸序列第1192‑1517位中至少任意一位半胱氨酸突变为G和/或A，优选突变为A。本发明还提供一种编码所述HCV重组抗原的核酸，包含所述核酸的表达载体，包含所述表达载体的宿主细胞，包含所的HCV重组抗原的缀合物，和包含所述HCV重组抗原的试剂盒等。

技术领域

本发明涉及HCV检测领域。具体而言，本发明涉及HCV重组抗原及其突变体，其可以用于检测来自受试者的样品中的HCV抗体的存在等。本发明还涉及编码所述的HCV重组抗原及其突变体的核酸以及相关的载体、宿主细胞、免疫测定法和检测试剂盒等。

背景技术

丙型病毒性肝炎，简称丙型肝炎或丙肝，是由丙型肝炎病毒(hepatits C virus，HCV)感染而引发的疾病，主要由血液或体液传播。据世界卫生组织估计，全球约有1.8亿人感染丙肝，全球HCV的感染率约为3％。在我国健康人群抗HCV阳性率为 0.7％-3.1％，约3800万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，导致约80％的HCV感染者发展为慢性肝炎，其中 10％-20％将发展成肝硬化，肝硬化患者中每年有1％-5％发展成为肝细胞癌症，因此，慢性HCV感染的流行成为世界各国一项重要的社会经济负担。

HCV为单股正链RNA病毒，基因组全长约9.5kb可分为3个区域，即5’非编码区(5’UTR)、编码区(ORF)、3’非编码区(3’UTR)，其排列顺序为 5′UTR-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3′UTR。5’UTR为高度保守区，是病毒翻译的起始位点，在HCV复制过程中有非常重要的作用。开放读码框架(ORF)包括结构蛋白区C、E1、E2和非结构蛋白区P7、NS2-NS5。包膜区(E1、E2)和核心区(C)编码病毒颗粒，非结构蛋白区在病毒复制和病毒蛋白合成中起重要作用。其中核衣壳蛋白 (Core)和非结构蛋白部分的NS2、NS3、NS4A、NS5A和NS5B等是目前主要的免疫诊断研究的重要靶点。

HCV核心蛋白(core蛋白)位于HCV基因组的第342-914核苷酸位点，编码191 个氨基酸，氨基酸序列十分保守。HCV core蛋白是一种具有多种生物学功能的病毒蛋白，除了具有组装病毒颗粒的功能外，还在HCV增殖及致病机制中起重要作用，是HCV感染的重要标志。HCV core蛋白在HCV感染后体内抗体阳转前即可产生，是患者体内HCV复制和HCV病毒载量的重要指标。由于高度保守且有很强的免疫原性，使得其在HCV诊断和疫苗的研究中应用广泛。NS3基因位于HCV全基因组序列第3300-5200核苷酸位点，编码含有630个氨基酸。NS3蛋白具有蛋白酶功能，其N 端的189个氨基酸具有丝氨酸蛋白酶活性，C端的442个氨基酸具有核苷三磷酸酶 (NTPase)和RNA解旋酶的活性。抗NS3抗体最早出现，NS3蛋白具有很强的抗原性，几乎所有的HCV感染者都会产生高滴度特异性的抗NS3抗体。NS4基因位于 HCV全基因组的第4974-5133位核苷酸，编码两个蛋白NS4A和NS4B。NS4A为54 个氨基酸的短肽，NS4B是一个27kDa大小的定位于ER膜的跨膜蛋白，具有很强的疏水性，NS4区含有至少两个免疫优势序列位点，抗原性强，绝大多数HCV感染者能产生针对该区的抗体。NS5基因编码区为全长3117个核苷酸，编码两个蛋白NS5A和 NA5B，是HCV基因组中最长的编码区。

随着基因工程技术的发展，对HCV病毒基因的分子生物学研究日趋成熟，并且应用于诊断试剂。HCV诊断试剂在不同检测平台上的主要使用core，NS3，NS4等基因片段，在诊断试剂中HCV诊断原料多以单独HCV-core、单独NS3、core+NS3嵌合、NS3+core嵌合、NS3+NS4嵌合等模式。嵌合方式的调整能够一定程度提高灵敏度，但是对特异性并没有很大帮助，因此，本领域仍然需要高灵敏度和高特异性检测 HCV的产品。

发明内容