[发明专利]一种改良的猪脑组织石蜡切片免疫组化染色方法

说明书

本发明生物医学技术领域，公开了一种改良的猪脑组织石蜡切片免疫组化染色方法，在有效降低了抗原修复液成本的情况下利于抗原的表达，同时也解决了修复方式不当引起修复过程中的掉片现象，是一种有效的猪脑组织石蜡切片免疫组化染色方法，应用前景广泛，值得大力推广。

技术领域

本发明属于医学化工技术领域，具体涉及一种改良的猪脑组织石蜡切片免疫组化染色方法。

背景技术

免疫组化在病理组织学实验中应用广泛，具有确定组织细胞内特定抗原，对其进行定位、定性及相对定量的研究的作用。在进行免疫组化实验中，封闭方法的选择，封闭液的种类、使用方法都对结果有很大的影响，抗原修复液的选择和使用方式都是决定了组化质量的关键因素。组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。

常规的猪脑组织免疫组化染色方法包括如下步骤：

1)石蜡切片，脱蜡与水化；

2)0.3％或3％H₂O₂去离子水(无色液体)孵育10-30min，以灭活内源性过氧化物酶活性；

3)蒸馏水冲洗，PBS浸泡5min3次

4)抗原修复：微波(建议30min内4次中火)、高压、酶修复方法；自然冷却，再用PBS冲洗3min×3次.

5)血清封闭：室温15-30min，尽可能与第二抗体来源一致；倾去，勿洗；

6)滴加适当比例稀释的第一抗体，37℃孵育2～3小时或4℃过夜(最好复温处理)；PBS冲洗，3min×5次；

7)滴加生物素标记的第二抗体，室温或37℃孵育30min-1h；

8)PBS冲洗，3min×5次；

9)滴加SP(链霉亲和素-过氧化物酶)，室温或37℃孵育30min-1h；10)PBS冲洗，3min×5次；

10)显色剂显色；

11)自来水充分冲洗；

12)可进行复染，脱水，透明；

13)选择适当的封片剂，封片。

但由于猪脑组织属于容易掉片的组织，抗原修复时间过长或者温度不适，易造成组织的脱落；抗原修复液通常使用柠檬酸盐修复缓冲液，只能一次性使用，因此大大增加了免疫组化的成本；在滴加第一抗体前未将细胞进行破膜，也不利于抗体的进入。

发明内容

本发明提出一种改良的猪脑组织石蜡切片免疫组化染色方法，以解决现有技术中存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。

为了克服上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种改良的猪脑组织石蜡切片免疫组化染色方法，包括脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与贴片、脱蜡、染色和封片。

作为上述方案的进一步改进，所述脱水过程中采用的脱水剂为无水乙醇。

作为上述方案的进一步改进，所述无水乙醇的体积浓度为50-100％，优选为70-100％

作为上述方案的进一步改进，所述脱水试剂中还包括水，优选为蒸馏水。

作为上述方案的进一步改进，所述透明过程中采用的透明剂为石蜡。

作为上述方案的进一步改进，所述脱蜡过程中采用的脱蜡剂为二甲苯。