[发明专利]一种定量检测甲状腺过氧化物酶的试剂盒和非诊断目的检测方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种定量检测甲状腺过氧化物酶的试剂盒和非诊断目的检测方法。该试剂盒包括微孔板、缓冲液、封闭液、样品稀释液、酶稀释液、甲状腺过氧化物酶标准品、甲状腺过氧化物酶抗体、生物酶标记的甲状腺过氧化物酶抗体、发光底物；样品稀释液包括甲状腺过氧化物酶抗体、PBST、新生牛血清、防腐剂和水。本发明专利通过ELISA方法，建立双抗体夹心两步法，在研发或生产重组、天然提取人甲状腺过氧化物酶时，方便及时精准的检测人甲状腺过氧化物酶含量，检测范围宽。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种定量检测甲状腺过氧化物酶的试剂盒和非诊断目的检测方法。

背景技术

甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase，TPO)是甲状腺微粒体的主要抗原成分，由甲状腺滤泡细胞合成，它是由933个氨基酸残基组成的分子量为103kD的10％糖化的血色素样蛋白质，在滤泡腔面的微绒毛处分布最为丰富。TPO作为甲状腺激素合成过程中的一种重要酶，能催化碘的活化、甲状腺球蛋白上酪氨酸残基的碘化及碘化酪氨酸残基的偶联，最终生成甲状腺素(T3、T4)，TPO也是甲状腺微粒体的主要抗原成分，当甲状腺发生病变，滤泡细胞结构受到破坏时，TPO于甲状腺滤泡细胞腔的边缘即甲状腺细胞顶部向外周血遗漏，刺激机体免疫系统产生TPO抗体(TPO-Ab)。TPO抗体通过激活补体、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用和致敏的T杀伤细胞直接杀伤等作用，引起甲状腺滤泡损伤，间接地抑制甲状腺素的合成，导致甲状腺功能减退。

甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)常见于患有自身免疫性甲状腺疾病的人群中，是一种甲状腺自身抗体，Anti-TPO阳性主要见于桥本甲状腺炎、原发性甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进患者等，其中桥本甲状腺炎患者检出率达到80％-90％，此类疾病多合并其他自身免疫性疾病，不易治愈，患者出现甲状腺过氧化物酶抗体高的情况时，应及时就医检查甲状腺过氧化物酶抗体高的原因，并进行相应的治疗，主要对于慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进症、原发性甲状腺功能减退症，有辅助诊断、疗效考核价值。

在甲状腺功能检测中检测人血清中甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)，已成为甲状腺功能基本的检测指标之一，针对甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)检测常用的是间接法进行检测，具体为用TPO抗原制备包被板，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与Anti-TPO含量成正比。

在检测人甲状腺过氧化物酶抗体时需要用到的核心生物材料甲状腺过氧化物酶(TPO)，目前TPO常用的表达体系为昆虫细胞-杆状病毒表达系统进行，但是在TPO制备过程中如何定量检测TPO的含量，进而筛选优化高表达的重组甲状腺过氧化物酶的培养条件，暂无相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种定量检测甲状腺过氧化物酶的试剂盒和非诊断目的检测方法。本发明专利通过ELISA方法，建立双抗体夹心两步法，在研发或生产重组、天然提取人甲状腺过氧化物酶时，方便及时精准的检测人甲状腺过氧化物酶含量，检测范围宽。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种定量检测甲状腺过氧化物酶的试剂盒，包括微孔板、缓冲液、封闭液、样品稀释液、酶稀释液、甲状腺过氧化物酶标准品、甲状腺过氧化物酶抗体、生物酶标记的甲状腺过氧化物酶抗体、发光底物；

样品稀释液中各组分的用量为：

作为优选，样品稀释液中各组分的用量为：

作为优选，酶稀释液包括如下组分：

作为优选，封闭液包括如下组分：