[发明专利]一种神经干细胞向神经元分化的体外培养方法

权利要求书

1.一种提高神经干细胞向Tuj1⁺神经元分化、减少其向星形胶质细胞分化并提高神经干细胞迁移能力的体外培养方法，其特征在于，其包括将神经干细胞置于含神经生长因子NT-3的分化培养基中并在微重力旋转细胞培养系统中培养的步骤；

每100ml所述含神经生长因子NT-3的分化培养基由以下组分组成：非必需氨基酸0.1mM，丙酮酸钠1mM，青链霉素混合液100U/ml，B27 2%，谷氨酸2 mM，葡萄糖33mM，NT-350ng/ml，以DMEM/F12补足至100ml；其中，所述非必需氨基酸为甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-脯氨酸和L-丝氨酸；

所述神经干细胞以胶原海绵为支架材料进行三维培养；

所述胶原海绵的制备方法包括如下步骤：取猪皮肤组织的内层组织置于0.5M醋酸中浸泡5h后取出进行匀浆处理；然后加入1%的胃蛋白酶，16℃处理48h；离心收集上清，上清中加入1.5M NaCl处理1h；离心收集沉淀，将沉淀置于水中采用分子量为3500的透析袋于16℃透析，将透析后的物质冻干；冻干物质于0.5M的乙酸中溶解；将pH调整至7后再冻干；加入1%戊二醛交联3h，清洗后再次冻干。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在微重力旋转细胞培养系统中培养的过程中，细胞贴附的材料保持悬浮状态。

3.根据权利要求1~2任一项所述的方法，其特征在于，所述神经干细胞的接种量为1×10⁵细胞/0.19cm³胶原海绵。

4.根据权利要求1~2任一项所述的方法，其特征在于，在微重力旋转细胞培养系统培养前，先对神经干细胞进行贴壁处理，使其粘附于胶原海绵支架材料上。