[发明专利]一种有效抑制表皮生长因子受体表达的siRNA序列

说明书

本发明公开了一种抑制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，简称为EGFR)基因表达的干扰RNA及其应用。特别是，上述干扰RNA为siRNA，其包含GCAACAUGUCGAUGGACUU和/或AAGUCCAUCGACAUGUUGC的核苷酸序列，其可有效抑制EGFR基因表达，为预防或治疗EGFR相关疾病(特别是EGFR相关的癌症)提供了新的选择。

技术领域

本发明涉及分子生物学与生物医药技术领域，具体涉及一种有效抑制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，简称为EGFR)基因表达的siRNA。

背景技术

脊椎动物细胞的许多生命活动受细胞外信号分子调控。这些信号通常由一些跨膜受体传过细胞膜，其中一类重要受体自身具有蛋白酪氨酸激酶活性，归属于受体蛋白酪氨酸激酶(RPTK)家族，表皮生长因子受体(EGFR)即是这一家族典型成员，其作用有赖于细胞膜内的信号传导通路，不同的通路其功能不同，相同的通路在不同的细胞甚至同一细胞的不同条件下具有不同的功能。

EGFR是一种存在于细胞表面的多功能跨膜蛋白分子，分布很广，其分子量为170kD，由1186个氨基酸残基构成，为原癌基因c-erbB1所编码。人EGFR基因位于第7号染色体p13-q22区，其结构分为3个区域：伸向膜外与EGF识别并结合的氨基端区域，位于细胞膜中间单链的a-螺旋跨膜区以及具有酪氨酸激酶活性的细胞质内的羧基端区域。细胞内542个氨基酸可分成3个结构域：近膜区(约50个氨基酸)起与PKC(蛋白激酶C)和erk MAPK(细胞外信号调节激酶丝裂素活化蛋白激酶)负反馈的结合位点，有证据表明这个区域有一基序(motif)可能联结异源三聚体G蛋白。紧接着是约250个氨基酸酪氨酸激酶区(SH1)，一个单一229个氨基酸长的羧基末端尾部包含5个自动磷酸化基序。它与含有SH2(src同源结构域2)或PTB(磷酸酪氨酸结合结构域)连接，至少有3个内在化基元包含一个牢固的转角、转磷酸位点、蛋自分解及降解位点。EGFR自动磷酸化基元结构相似、功能余冗，不同于其他的RPTK，简单的结构和复杂余冗基序的交替发生表示出一个原始型基因。

EGFR的配体与细胞膜上的EGFR结合，可使受体形成二聚体，二聚化的受体使其白身酪氨酸激酶被激活；受体上磷酸化的酪氨酸又与位于膜上的生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的SH2结构域结合，而Grb2的SH3结构域则同时与鸟苷酸交换因子SOS(Son ofSevenless)结合，后者使小分子鸟苷酸结合蛋白Ras的GDP解离而结合GTP，从而激活Ras；激活的Ras进一步与丝/苏氨酸蛋自激酶Raf-1的氨基端结合，通过未知机制激活Raf-1；Raf-1可磷酸化MEKl/MEK2 MAP kinase/ERK kinade上两个调节性丝氨酸，从而激活MEK；MEK为特异性激酶，可以使丝/苏氨酸和酪氨酸发生磷酸化，最终高度选择性地激活ERK1和ERK2。ERKs为脯氨酸导向的丝/苏氨酸激酶，可以磷酸化与脯氨酸相邻的丝/苏氨酸。在丝裂原刺激后，ERK接受上级的级联反应信号，可以转位进人细胞核。因此，ERK不仅可以磷酸化胞浆蛋白，而且可以磷酸化一些核内的转录因子如c-fos，c-jun，Elk-1，c-myc和ATF2等，从而参与细胞增殖与分化的调控。

EGFR信号传导的深入研究，对于阐明细胞生长、发育、分裂、细胞间功能同步等多种生理过程及细胞恶性转化等病理过程有重要的意义。EGFR在人类许多肿瘤中常发现有过度表达，由于它是早期作为转化γ-erbB癌基因的原癌基因和多数肿瘤发生而被识别，因而EGFR介导的下游信号可能代表了攻克肿瘤的新途径。

专利文献CN 101671397 B公开了一种以表皮生长因子受体为靶点的重组免疫毒素。该重组免疫毒素是由EGFR的单链抗体与毒素蛋白Gelonin融合表达而成。该技术方案利用单链抗体对EGFR高表达肿瘤的靶向性和Gelonin的细胞毒作用对肿瘤起到特异的杀伤作用，效果明显。