[发明专利]一种雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因的开放阅读框及引物和应用

说明书

本发明提供了一种雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因的开放阅读框及引物和应用，属于植物基因工程技术领域。本发明所述雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因的开放阅读框的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明提供的雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因在雌花两性花同株灌木柳的两性花中表达，而在雌花两性花同株灌木柳的雌花中不表达，该基因能够准确的鉴别雌花两性花同株灌木柳的两性花和雌花，弥补了在雌花两性花同株灌木柳开花前不能辨别两性花和雌花的空白。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，特别是涉及一种雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因的开放阅读框及引物和应用。

背景技术

柳树属于杨柳科(Salicaceae)，是柳属(Salix)和钻天柳属(Chosenia)的通称。平常所说的柳树(SalixL.)主要指柳属所包括的所有树种。柳树属落叶乔木或灌木，种类多，生长快，根系发达，易繁殖，适应性强，是防护林、水土保持林、风景林及用材林的重要组成树种，具有较高的生态和经济价值。现阶段鉴别雌花两性花同株的方法为肉眼观测，但仍存在只能等灌木柳开花后才能辨别性别的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因的开放阅读框及引物和应用。本发明提供的基因能够准确鉴别雌花两性花同株灌木柳中的两性花和雌花。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因的开放阅读框，所述开放阅读框的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明提供了一种用于扩增上述技术方案所述开放阅读框的引物对，所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

本发明提供了上述技术方案所述基因或开放阅读框或引物对在鉴别雌花两性花同株灌木柳的两性花和雌花中的应用。

优选的，所述鉴别的时期为雌花两性花同株灌木柳开花前。

优选的，所述应用包括以下步骤：

1)提取雌花两性花同株灌木柳待检测花或花芽的RNA，进行反转录，得到cDNA；

2)以所述cDNA为模板，采用上述技术方案所述引物对进行PCR扩增反应，得到PCR产物；

3)对所述PCR产物进行检测，检测结果为阳性，则表明待检测花或花芽为两性花；检测结果为阴性，则表明待检测花或花芽为雌花。

优选的，所述步骤2)中PCR的反应程序包括：94℃、5min；94℃、30s；60℃、15s；68℃、30s；40个循环；68℃、7min。

优选的，所述步骤2)中PCR的反应体系以50μl计，包括：cDNA模板1μl，正向引物1.5μl，反向引物1.5μl，dNTP 3μl，KOD酶1μl；Mg²⁺3μl，Buffer 5μl和余量的水。

优选的，所述正向引物和反向引物的浓度分别为10μM。

优选的，步骤3)中对所述PCR产物进行检测的方法包括：将所述PCR产物连接T载体后，转入大肠杆菌，选取单克隆测序。

本发明提供了一种雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因的开放阅读框，所述开放阅读框具有如序列表中SEQ ID No.1所示核苷酸序列。本发明提供的雌花两性花同株灌木柳SpSRY基因在雌花两性花同株灌木柳的两性花中表达，而在雌花中不表达，该基因能够准确的鉴别雌花两性花同株灌木柳的两性花和雌花，弥补了在雌花两性花同株灌木柳开花前不能辨别两性花和雌花的空白。由此可见，该基因在雌花两性花同株灌木柳的性别发育和性别转换中具有重要的理论指导意义。

附图说明