[发明专利]一种鉴定GCDH基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种鉴定GCDH基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法。所述试剂盒中含有如下引物对：F1：CCTTCCCAGCCTCGCGTCCCGAGTTTGAGT；R1：GAAGCAGCCCAGGAGCTCCCCCAT；F2：CCTTCCCAGCCTCGCGTCCCGAGTTTGTCA；R2：GAAGCAGCCCAGGAGCTCCCCGTC；所述两个突变位点为C.148TA、C.508AG突变位点。本发明能够鉴定C.148TA、C.508AG突变位点是在同一条染色体，还是不同的染色体上，工作量小，耗时短，易操作。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种鉴定PAH基因同时含两个突变位点(C.148TA、C.508AG)位置的试剂盒及方法。

背景技术

戊二酸血症I型是一种常染色体隐性遗传有机酸血症，由细胞内戊二酰辅酶A脱氢酶(GCDH)发生致病突变所致。GCDH是赖氨酸、羟赖氨酸和色氨酸降解通路中的关键酶，发生致病突变会导致该酶活性降低或缺失，赖氨酸、羟赖氨酸和色氨酸分解代谢受阻，造成戊二酸、3-羟基戊二酸等旁路代谢产物在体内异常蓄积，在中枢神经系统尤为明显，可引起急性脑病危象，临床主要表现为大头畸形、进行性肌张力异常和运动障碍。

不同的GCDH基因的突变对GCDH活性及结构影响的程度不同。针对于本案中涉及到的两个突变位点，发生在同一条或者不同的染色体上，对患者病情严重程度的影响是不同的。如果两个突变发生在同一条染色体上，则不致病；两个突变分别发生在不同的染色体上，则致病。为了评估疾病的严重程度，鉴定已知的不同的GCDH基因突变分布在同一条还是不同染色体上，对疾病的诊断具有决定性作用。现有的方法是提取DNA，构建载体，进行体外表达实验，需要全套的分子生物学及微生物、细胞培养的实验室，难度极大，且工作量大，耗时长，普通实验室难以实施。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种鉴定GCDH基因同时含两个突变位点位置的试剂盒及方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

鉴定GCDH基因同时含两个突变位点位置的试剂盒中含有如下引物对：

F1：CCTTCCCAGCCTCGCGTCCCGAGTTTGAGT(SEQ ID NO.1)

R1：GAAGCAGCCCAGGAGCTCCCCCAT(SEQ ID NO.2)

F2：CCTTCCCAGCCTCGCGTCCCGAGTTTGTCA(SEQ ID NO.3)

R2：GAAGCAGCCCAGGAGCTCCCCGTC(SEQ ID NO.4)；

所述两个突变位点为：C.148TA、C.508AG突变位点。

优选地，引物对按如下排列组合使用：

①：F1+R1

②：F1+R2

③：F2+R1

④：F2+R2。

优选地，根据C.148TA、C.508AG突变分布情况，引物对按如下排列组合使用：

①：当待测样本同时含C.148TA、C.508AG突变但分布在不同染色体上时：F1+R2或F2+R1；其中，F1和R1是检测野生型的引物；

②当待测样本同时含C.148TA、C.508AG突变且分布在同一条染色体上时：F2+R2。

基于上述试剂盒鉴定同时含C.148TA、C.508AG突变位点的方法是采用所述试剂盒中的引物对，在如下次序和条件下进行扩增检测：

①：94℃，5min；