[发明专利]基于金属-DNA配位的杂化纳米球及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202010940431.1 | 申请日： | 2020-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN114231599B | 公开（公告）日： | 2023-07-18 |
| 发明（设计）人： | 欧阳津;贾轶静;那娜 | 申请（专利权）人： | 北京师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6841 | 分类号： | C12Q1/6841;C12Q1/682;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 张立娜 |
| 地址： | 100875 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 金属 dna 纳米 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种基于金属-DNA配位的杂化纳米球的制备方法，包括如下步骤：1）设计并合成能够特异性识别靶标microRNA的两个HCR发夹探针，记为探针H1、探针H2；
2）将所述探针H1和所述探针H2在HEPES缓冲液中分别进行退火；
3）将步骤2）中退火后的所述探针H1和所述探针H2的HEPES缓冲液分别用水稀释，然后混合得到混合体系，将所述混合体系与含Zn离子的溶液经涡旋混合，得到混合物，将其静置后离心，收集沉淀物即得到杂化纳米球NWs；
所述靶标microRNA为miRNA-21；
所述探针H1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述探针H2的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤2）中，所述HEPES缓冲液浓度为10 mM，通过HEPES溶解于100 mM NaCl和20 mM MgCl2配制而成，其pH值为7.2。
3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤2）中，所述探针H1和所述探针H2在所述HEPES缓冲液中浓度为10 µM。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤2）中，所述退火是通过如下实现的：分别加热含有所述探针H1的HEPES缓冲液和含有所述探针H2的HEPES缓冲液至其变性后自然冷却。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述加热至变性的反应温度为95°C，时间为5~10分钟。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述冷却后温度为室温，所述冷却的时间为2~4小时。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）中，所述混合体系中所述探针H1和所述探针H2的浓度均为2.5μM。
8. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）中，所述含Zn离子的溶液中Zn离子的浓度为4 mM。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）中，所述混合体系中所述探针H1和所述探针H2的总量与所述含Zn离子的溶液中Zn离子的摩尔比为1:42。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）中，所述含Zn离子的溶液为ZnCl2溶液。
11. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）中，所述涡旋的时间为20~30 s。
12.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）中，所述静置的温度为95°C；时间为3小时。
13.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）中，所述离心的离心力为10919g~17744g，时间为15~25分钟。
14.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）中，所述离心后还包括将所述沉淀物用水清洗2~3次的步骤。
15.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤3）之后还包括将所述杂化纳米球NWs分散在水中储存备用的步骤。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其特征在于：所述探针H2的茎环结构中标记有荧光基团和荧光淬灭基团。
17.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于：所述荧光基团为FAM；所述荧光淬灭基团为BHQ1。
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