[发明专利]荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡及检测方法

权利要求书

1.荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡，包括卡壳和装于卡壳内的试纸条；其特征在于：

所述试纸条包括底板，以及粘贴于底板上的硝酸纤维素膜、结合垫和样品垫；所述样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜依次首尾相互重叠一段预设长度；

所述硝酸纤维素膜上通过划线包被幽门螺杆菌天然抗原；所述结合垫上喷涂有包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的镧系元素标记的乳胶微球。

2.根据权利要求1所述的荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡，其特征在于，所述包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的镧系元素标记的乳胶微球通过以下方法步骤制备：

步骤I.在20℃～25℃温度条件下，将幽门螺杆菌重组蛋白抗原包被镧系元素标记的乳胶微球4～6h，包被浓度为20～50μg幽门螺杆菌重组蛋白抗原/1mg镧系元素标记的乳胶微球；

步骤II.12000～15000r/m条件下离心30min，分离出包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的的乳胶微球并用0.01mol/L的PBS洗涤3次，然后加入到终浓度为1～2％BSA和1～2％酪蛋白的封闭液中封闭包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的乳胶微球30min；

步骤III.用0.01mol/L的PBS洗涤3次封闭后的包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的乳胶微球；

步骤IV.用0.01mol/L的PBS重悬包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的镧系元素标记的乳胶微球，备用。

3.根据权利要求2所述的荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡，其特征在于，所述步骤I中，用于包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的镧系元素标记的乳胶微球的粒径为100～150nm。

4.根据权利要求2或3所述的荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡，其特征在于，所述包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的镧系元素标记的乳胶微球通过点膜仪喷涂于结合垫上，喷涂完成后在干燥间室温干燥。

5.根据权利要求1所述的荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡，其特征在于，在所述硝酸纤维素膜上，通过划线包被幽门螺杆菌天然抗原的方法步骤如下：

步骤i.用0.01mol/L的PBS将幽门螺杆菌天然抗原稀释成0.2～0.5mg/ml；

步骤ii.用点膜仪将经步骤i稀释后的幽门螺杆菌天然抗原在硝酸纤维素膜上按1μl/cm进行划线包被；

步骤iii.幽门螺杆菌天然抗原包被完成后，将硝酸纤维素膜在干燥间室温干燥，备用。

6.根据权利要求1所述的荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上还通过划线包被鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体，用于质控。

7.根据权利要求1所述的荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡，其特征在于，在所述硝酸纤维素膜上，通过划线包被鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体的方法步骤如下：

步骤①.用0.01mol/L的PBS将鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体稀释成0.2～0.5mg/ml；

步骤②.用点膜仪将经步骤i稀释后的鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体在硝酸纤维素膜上按1μl/cm进行划线包被；

步骤③.鼠抗幽门螺杆菌单克隆抗体包被完成后，将硝酸纤维素膜在干燥间室温干燥，备用。

8.根据权利要求1所述的荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡，其特征在于，所述试剂卡的组装在干燥间内完成，具体步骤如下：

步骤一、在底板中央贴上包被幽门螺杆菌天然抗原的硝酸纤维素膜；

步骤二、在硝酸纤维素膜上缘粘贴喷涂有包被幽门螺杆菌重组蛋白抗原的镧系元素标记的乳胶微球的结合垫；

步骤三、在结合垫上缘粘贴样品垫，获得试纸板；

步骤四、用裁切机将贴好的试纸板切成宽度与卡壳适配的试纸条，然后将试剂条装入卡壳内，完成试剂卡的组装。