[发明专利]一种间充质干细胞成脂分化培养基及其应用

说明书

本发明涉及一种间充质干细胞成脂分化培养基及其应用，其特征在于包括基础培养基和添加组分，所述培养基包括:优化设计的多种无机盐、氨基酸、维生素等成分、以及重组人血清白蛋白、羧甲基纤维素钠、3‑异丁基‑1‑甲基黄嘌呤、重组人胰岛素、地塞米松、匹格列酮盐酸盐、棕榈酸、油酸、亚油酸、胆固醇等成分。本发明通过优化设计各组分的添加以及配比，显著提高了培养基诱导间充质干细胞向脂肪细胞分化的能力，分化时间进一步缩短。

技术领域

本发明属于属于细胞培养技术领域，具体涉及一种间充质干细胞成脂分化培养基及其用。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)，起源于中胚层，是一种多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，具有强大的自我更新和多向分化能力，具有在体外分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、神经细胞等多种细胞的能力。

间充质干细胞来源丰富，广泛存在于骨髓、脂肪、脐带等组织，具有来源方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，并且具有低免疫原性，异体移植排异较轻，配型要求不严格；具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应，从而发挥免疫重建的功能；正是由于拥有这些特性，使得间充质干细胞能够提供一种理想的生物学平台，用于科学研究与临床应用，如细胞治疗、再生医学、药物筛选、基因治疗载体的建立、细胞发育与分化的分子调节机制研究、组织工程种子细胞等。

无论在科学研究还是临床应用上，间充质干细胞的鉴定一直是需要面对的问题。更由于临床应用的特殊性，用于细胞治疗的间充质干细胞的鉴定越来越受到重视，国家有关部门也出台了相关文件，《干细胞临床研究管理办法(试行)》(国卫科教发〔2015〕48号)和《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则(试行)》明确提出可通过检测干细胞分化潜能、诱导分化细胞的结构和生理功能、对免疫细胞的调节能力、分泌特定细胞因子、表达特定基因和或蛋白等功能，判断干细胞制剂与治疗相关的生物学有效性。对间充质干细胞，无论何种来源，应进行体外多种类型细胞(如成脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞等)分化能力的检测，以判断其细胞分化的多能性。

目前也有效果较好的商业化培养基，如STEMCELL公司的成脂分化培养基产品(STEMCELL，05412)，分化效果优良，在部分间充质干细胞中可以实现7-14天成脂分化，但是该培养基成本很高。

目前也有同类型专利申请，通常采用胎牛血清、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、糖皮质激素和噻唑烷二酮等物质协同作用，诱导成脂分化，虽然这些成分也能诱导间充质干细胞的成脂分化，但是其分化效率较低，所用时间较长，存在效能不足的缺陷。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明设计开发了一种新的间充质干细胞培养基。

本发明的第一个目的是，针对现有成脂分化培养基分化效率低、分化时间长的不足，提供一种间充质干细胞成脂分化培养基，可以实现更短时间诱导间充质干细胞向脂肪细胞的分化。

本发明的第二个目的是，提供间充质干细胞成脂分化培养基的用途。

为了实现上述第一个目的，本发明采用的技术方案是：

基础培养基和添加组分组成，基础培养基由无机盐组分、氨基酸组分、维生素组分、核苷酸组分、微量元素组分和碳水化合物组成，添加组分由重组人血清白蛋白、羧甲基纤维素钠、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、重组人胰岛素、地塞米松、匹格列酮盐酸盐、棕榈酸、油酸、亚油酸、胆固醇组成。

优选的，添加组分以体积计，各成分的含量为：重组人血清白蛋白100g/L、羧甲基纤维素钠100g/L、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤50mM、重组人胰岛素500uM、地塞米松50uM、匹格列酮盐酸盐1mM、棕榈酸3mM、油酸1mM、亚油酸3mM、胆固醇1mM；

基础培养基与添加组分的体积比为100：0.1～100：3。