[发明专利]一种脐带血干细胞分离制备方法在审
申请号: | 202010925834.9 | 申请日: | 2020-09-04 |
公开(公告)号: | CN112029726A | 公开(公告)日: | 2020-12-04 |
发明(设计)人: | 李伟;王熙凯;赵庆义 | 申请(专利权)人: | 中康再生医学科技(海南)有限公司 |
主分类号: | C12N5/0789 | 分类号: | C12N5/0789 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 570000 海南省海口市秀英区南海大道*** | 国省代码: | 海南;46 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 脐带血 干细胞 分离 制备 方法 | ||
1.一种脐带血干细胞分离制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1,脐带血的采集:在产妇胎盘脱落后,使用含枸橼酸钠或肝素的抗凝液的采血袋,将采血袋上的针头插入脐静脉中,一边采集一边轻轻晃动采血袋,使抗凝液与脐带血充分混合,得到脐带血预处理样品;
S2,将脐带血预处理样品倒入大容量无菌培养瓶中,按体积比1∶1向培养瓶中加入含有脑蛋白水解物和生理盐水的稀释剂,盖上瓶盖,摇匀,得到稀释细胞液;
S3,在步骤S2得到的稀释液中,加入红细胞沉淀剂;混合均匀后,静止30-60分钟,观察到有明显分层,且分层不再变化时,移取上层细胞液分装至离心管中,进行梯度离心分离,所述梯度离心分离,分三步进行:第一步,设置离心条件:300g×5min;第二步设置离心条件:600g×5min;第三步设置离心条件为:1100g×5min;
S4,离心完毕后,离心管内的细胞液分为三层,上层为血浆,中层为脐带血干细胞,下层为红细胞,移取中层脐带血干细胞至另一离心管内;
S5,在收集脐带血干细胞的离心管内加入生理盐水进行稀释,轻轻混匀后进行离心分离,离心分离的条件设置为500g×5min,离心后再用生理盐水洗涤沉淀层;其中,所述的生理盐水中含有浓度为1-3%的脑蛋白水解物,最后收集离心管底部的脐带血干细胞。
2.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞分离制备方法,其特征在于,在步骤S2中,所述稀释剂中,脑蛋白水解物的质量分数为0.5-10%,生理盐水中氯化钠的质量分数为8-20%。
3.根据权利要求2所述的一种脐带血干细胞分离制备方法,其特征在于,在步骤S2中,所述脑蛋白水解物的质量分数为5%,生理盐水中氯化钠的质量分数为10%。
4.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞分离制备方法,其特征在于,步骤S3中,所加入的红细胞沉淀剂体积为稀释液体积的一半,所述红细胞沉淀剂由质量分数为10-20%的羟乙基淀粉溶液组成,该溶液以8%氯化钠的生理盐水为溶剂。
5.根据权利要求1所述的一种脐带血干细胞分离制备方法,其特征在于,步骤S3中,所加入的红细胞沉淀剂体积为稀释液体积的一半,所述红细胞沉淀剂由质量分数为10-20%的甲基纤维素溶液组成,该溶液以8%的生理盐水为溶剂。
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