[发明专利]一种动物胚胎或胎盘的提取工艺

说明书

本发明提供一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，涉及生物工程领域。该动物胚胎或胎盘的提取工艺，包括以下步骤：S1胎盘与胚胎分离；S2破碎细胞结构；S3粗过滤工作；S4离心分离；S5成分提取（S5.2胚胎成分分离、S5.1胎盘成分分离）。通过如上提取过程，使得动物胎盘与胚胎分离中的层粘连蛋白、纤连蛋白和小分子肽可以以高纯度的状态被提取出来，减少资源的浪费，由于纯度较高可以直接用于研究与产品制备，在使用过氧化氢酶分解过氧化氢后，可以有效防止动物胚胎与胎盘细胞中过氧化氢的作用使其内的蛋白发生不可逆变性，在脂肪酶分解脂肪后，可以便于蛋白质的分离。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体为一种动物胚胎或胎盘的提取工艺。

背景技术

胎盘是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官。胎盘与死胚胎中均含有丰富活性多肽和蛋白质。其中蛋白质中的层粘连蛋白、纤连蛋白对人体具有极大的益处，同时也是进行科学研究的前沿蛋白，具有很高的价值，而在畜牧场所，动物生育完胎盘、死胚胎都是直接丢弃，造成极大的浪费。

发明内容

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，解决了动物生育完胎盘、死胚胎直接丢弃，造成浪费的问题。

（二）技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种动物胚胎或胎盘的提取工艺，包括以下步骤：

S1 胎盘与胚胎分离

将动物胎盘与胚胎分离，使用10～15℃的去离子水进行清洗，反复清洗三次，剔除胎盘中的骨质结构；

S2 破碎细胞结构

将S1中处理过的动物胎盘或胚胎，进行初步绞碎，接种入过氧化氢酶、脂肪酶，保持适宜的酶解条件，酶解20～24h，之后置于超声波装置中，并在其中加入1.2～1.25倍体积的去离子水，加入与动物胎盘或胚胎重量比为1:12～15的硫酸铵，在30KHZ～80KHZ下处理25～30min；

S3 粗过滤工作

使用0.5～1mm的滤网进行过滤，得到的滤液，过滤下的滤渣返回至S2中再次进行处理；

S4 离心分离

将滤液放入超速离心机中，以8000～15000rad/min的转速分离，在分层后取出蛋白质层；

S5 成分提取

S5.1 胎盘成分分离

将离心分离后的蛋白质层成分，采用毛细电泳技术分离提纯蛋白质，之后将加入硫酸乙酰肝素糖蛋白，在静置2～3d后，取下层蛋白，即得到层粘连蛋白，将剩余的蛋白质使用石墨烯修饰的二氧化钛吸附，即可在石墨烯修饰的二氧化钛表面得到纤连蛋白，将携带纤连蛋白的石墨烯修饰的二氧化钛在真空中进行离心，即可将纤连蛋白分离出来，石墨烯修饰的二氧化钛往复吸附，并将分离出来的纤连蛋白进行集中收集，将最后剩余的蛋白质进行收集保存；

S5.2 胚胎成分分离

将蛋白质层加入蛋白酶，控制酶解条件至适宜，酶解2～3d，之后加入有机溶剂，之后使用反相高效液相色谱法分离出小分子肽。

优选的，所述破碎细胞结构过程与胚胎成分分离中严格保持酶解条件的稳定。

优选的，所述S1处理后的动物胎盘与胚胎可在加入保护剂和甘油后冷冻后置于-196℃的液氮中低温保存，所述保护剂的终浓度5%，所述甘油的浓度为15%。

优选的，所述有机溶剂为丙酮、异丙醇、正丁酮中的任意一种。