[发明专利]一种水牛角特征肽段及其检测方法

说明书

本发明公开了一种水牛角特征肽段，本发明通过大量实验筛选，筛选出Gly‑Pro‑Ser‑Leu‑Ala‑Gly‑Ser‑Ala‑Ser‑Ser‑Val‑Arg等4条水牛角特征肽，这4条水牛角特征肽具有很高的专属性，可用于鉴定含有水牛角药材的药品。本发明提供的水牛角特征肽及其检测方法，通过大量实验筛选出最佳的色谱条件和质谱条件，整个方法操作简单，判断准确，能准确区分水牛角特征肽。本发明提供的水牛角特征肽及其检测方法，有利于水牛角药品的质量控制，对保证含有水牛角药品的质量具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及一种动物药的检测鉴别方法，具体涉及水牛角特征肽段及其检测方法。

背景技术

水牛角Bubali Cornu为牛科动物水牛Bubalus bubalis Linnaeus的角，始载于《名医别录》：“疗时气寒热头痛”，性味苦咸、寒，具清热、解毒、凉血、定惊之功效，是中医临床及中药制药行业的重要品种。现代研究表明水牛角具有良好的解热、镇静等功效，目前中医临床及中药制药行业以水牛角替代犀角应用于方剂及中成药：清营汤、犀角汤、犀角地黄汤等均以水牛角替代犀角，这些方剂在清热解毒、定惊凉血等方面均取得了较好的疗效。临床资料分析表明，水牛角替代犀角治疗乙脑、小儿夏季热、急性扁桃体炎等高热病证的效果明显。水牛角物质基础研究表明，蛋白质类、肽类、氨基酸类、甾醇类、核苷类、无机元素类等为其主要成分。水牛角质量标准并不完善，水牛角药材、浓缩粉、含水牛角的成方制剂缺少专属性鉴别、含量测定的方法，药材市场存在以其它角类或蹄甲混售的现象。有研究表明基于COI序列的DNA条形码技术可用于鉴别水牛角药材混伪品，但是中药高温提取过程会影响DNA的完整性，进而影响DNA条形码鉴定的准确性，相较于DNA分子，蛋白质、肽类成分的一级序列信息在高温提取条件下保存较好，I型角蛋白(Keratin,typeI)、II型角蛋白(Keratin,typeII)、 I型胶原(Type I Collagen)等蛋白质类成分为水牛角、羚羊角、山羊角等角类动物药重要物质基础。本发明通过检测4个水牛角特征肽来检测水牛角成分，该方法为水牛角质量研究提供了参考与依据，有利于水牛角及其制品质量标准进一步完善。

发明内容

本发明主要目的是针对上述存在的问题与不足，提供一种水牛角特征肽及检测角类动物药中水牛角特征肽的方法。本发明提供的水牛角特征肽专属性强。提供的方法操作简单，灵敏度高，能准确鉴定角类动物药中是否含有水牛角成分，为保证水牛角及其制品的质量提供科学方法。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种水牛角特征肽段混合对照品溶液，它由肽1、肽2、肽3和肽4配制而成，其中水牛角特征肽序列如序列表1：

肽1：Gly-Pro-Ser-Leu-Ala-Gly-Ser-Ala-Ser-Ser-Val-Arg

肽2：Gly-Gly-Val-Thr-Cys-Gly-Gly-Leu-Thr-Tyr-Ser-Thr-Thr-Ala-Gly-Arg

肽3：Ile-Cys-Glu-Gly-Val-Gly-Pro-Val-Asp-Ile-Ala-Val-Ser-Ser-Ser-Arg

肽4：Leu-Val-Asn-Glu-Leu-Thr-Glu-Phe-Ala-Lys。

一种水牛角特征肽的检测方法，包括以下步骤：

(1)取水牛角特征肽段混合对照品溶液；

(2)将待检测角类动物药样品，用胰蛋白酶进行酶切后，将酶解液和步骤 (1)水牛角特征肽混合对照品溶液分别注入液质联用仪，以水牛角特征肽为对照，采用多反应监测模式，选择的母离子包括：m/z544.8(双电荷)、m/z519.9 (三电荷)、m/z549.3(三电荷)及m/z582.3(双电荷)，进行检测；如果检测出上述离子对中任意2个及以上，且离子的保留时间与水牛角特征肽对照品一致，其子离子与对照品的子离子一致，则所述待检测样品中含有水牛角成分。