[发明专利]一组检测不同基因型猪圆环病毒的引物探针组及试剂盒

权利要求书

1.一组检测不同基因型猪圆环病毒的引物探针组，所述不同基因型猪圆环病毒包括猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型和猪圆环病毒4型，其特征在于，检测猪圆环病毒2型的引物探针包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的PCV2上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的PCV2下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的PCV2荧光素标记探针；检测猪圆环病毒3型的引物探针包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的PCV3上游引物、核苷酸序列如SEQID NO.5所示的PCV3下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的PCV3荧光素标记探针；检测猪圆环病毒4型的引物探针包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的PCV4上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的PCV4下游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的PCV4荧光素标记探针；不同基因型猪圆环病毒的荧光素标记探针的荧光报告基团属于不同检测通道。

2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述荧光报告基团包括FAM、VIC、HEX、JOE、NED、TAMRA、CY3、ROX和CY5。

3.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述不同基因型猪圆环病毒的荧光素标记探针的猝灭基团包括BHQ。

4.基于权利要求1～3任一项所述引物探针组的检测不同基因型猪圆环病毒的试剂盒，所述试剂盒包括：酶混合液和含权利要求1～3任一项所述引物探针组的PCR反应液；所述酶混合液包括0.5U/μL的Taq DNA聚合酶、20mM的Tris-HCl、0.05mM的EDTA、0.05mM的DTT、体积百分含量为40％的甘油和体积百分含量为0.2％的Tween-20；所述PCR反应液包括：10μM的各上游引物、10μM的各下游引物、5μM的各探针、反应缓冲液10mM的Tris-HCl、1.5mM的dNTPs和ddH₂O。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为多重实时荧光PCR试剂盒。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，每20μL所述试剂盒的反应体系包括10μL的酶混合液、8μL的PCR反应液和2μL的待测样品。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述待测样品包括血清、组织、粪便和环境拭子。

8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应条件为：95℃30sec；40个循环，每个循环为95℃5sec，62℃30sec；每个循环的第二步收集荧光信号。