[发明专利]一种烟草或烟草制品中生物碱的手性分析方法

权利要求书

1.一种烟草或烟草制品中生物碱的手性分析方法，该方法包括如下步骤：

（1）称取50~200 mg样品于15 mL离心管中，加入1 mL内标溶液和9 mL浓度为0.1 mol/L的乙酸铵水溶液，振荡混匀后，超声萃取30~60 min，萃取液过0.22 μm滤膜后取100~1000 μL于离心管中，加入萃取液5~10倍体积的甲醇后，涡旋振荡2~5 min，以10000~15000 rpm的速度离心5~10 min后，取上清液，备用；

（2）取步骤（1）得到的上清液进行高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）分析，分析条件如下：

色谱条件：色谱柱为长度×内径×粒径为250×4.6mm×3μm的Chiralpak IG-3色谱柱，柱温为20℃；流动相为质量分数为0.2%的甲酸铵/甲醇溶液，梯度洗脱程序为：初始流速0.4mL/min，保持12min，13min时流速升至0.8 mL/min，保持17min，运行总时间为30 min；进样体积为5 μL；

质谱条件：离子源：电喷雾离子源；离子化方式：ESI+；检测模式：MRM模式；离子源温度（TEM）：550℃；电喷雾电压（IS）：5500 V；碰撞气（CAD）：4.8×10⁴ Pa；气帘气（CUR）：2.8×10⁵Pa；离子源气流GS1：3.8×10⁵ Pa；离子源气流GS2：4.1×10⁵ Pa；入口电压（EP）：10 V；射出电压（CXP）：10 V；

目标化合物和内标的MRM质谱检测参数如下所示：

（3）根据采用内标标准曲线法定量计算样品中目标物的含量；其中，所述内标标准曲线法为：配制含有目标物的系列标准工作溶液，加入内标麦斯明-d4，以各标准工作溶液中目标物与内标物的定量离子峰面积比为纵坐标，以各标准工作溶液中目标物的含量为横坐标制作标准工作曲线；将步骤（2）的分析结果代入标准曲线中，得到待测溶液中的目标物含量，再进一步计算得到样品中各目标物的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述内标溶液为麦斯明-d4的甲醇溶液，浓度为8 μg/mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述超声萃取的时间为30min。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述系列标准工作溶液中，各目标物的浓度范围如下：烟碱为0.20~20μg/mL，可替宁为2~500 ng/mL，降烟碱为10~1000ng/mL，新烟草碱为2~5000 ng/mL，N-甲基假木贼碱为2~500 ng/mL。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述烟草或烟草制品包括烟叶样品、无烟气烟草制品、雪茄烟、加热不燃烧型卷烟、烟用薄片、卷烟烟丝。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述烟叶样品选自烤烟、白肋烟、香料烟和马里兰烟。