[发明专利]一种促进神经干细胞增殖的方法

权利要求书

1.一种促进神经干细胞增殖的方法，其特征在于，包括：

采用差速贴壁法去除正常培养的神经干细胞的饲养层MEF细胞；将干细胞按照1×10 ⁴个/孔接种到多孔板上，在扩增培养基中培养；

所述扩增培养基包括：高糖DMEM15~18质量份，非必需氨基酸7~9质量份，谷氨酰胺0.5~0.8质量份，β-巯基乙醇0.001~0.05质量份，白血病抑制因子1000U/mL，纳米层状双氢氧化物0.08~0.1质量份；

所述纳米层状双氢氧化物的制备方法为：取硝酸镍15~20质量份，硝酸铝10~20质量份，氢氧化钠40~50质量份，碳酸钠20~40质量份，碳纳米管15~20质量份；

将硝酸镍和硝酸铝溶解于1000~1200质量份的去离子水中得到混合盐溶液，将氢氧化钠和碳酸钠溶解于800~1000质量份的去离子水中得到混合碱液；

将碳纳米管加入到混合碱液中，超声分散10~20min，得到分散液，将分散液同混合盐溶液混合，搅拌均匀，再超声分散30~50min，得到混合液；

将混合液转移至水热合成装置中，在氮气环境中进行水热反应，反应温度为100~110℃，反应12~36h后过滤，洗涤产物，在80~90℃下干燥24~48h，粉碎得到纳米层状双氢氧化物;

所述碳纳米管为改性碳纳米管, 所述改性碳纳米管的制备方法为：

取碳纳米管10~15质量份，钛酸丁酯25~30质量份，钨酸钠8~10质量份，无水乙醇100~120质量份，28%氨水25~40质量份，30%过氧化氢溶液1~2质量份；

将碳纳米管加入到100~200倍量的浓硝酸中，加热回流5~8h，冷却，用去离子水稀释，离心，过滤，取固体物质多次洗涤后烘干，研磨得到纯化的碳纳米管；

将纯化的碳纳米管分散到无水乙醇中，再缓慢加入钛酸丁酯，超声搅拌1~3h，得到第一分散液；

将钨酸钠溶解在28%氨水中，再缓慢加入30%的过氧化氢，超声20~30min，得到第二分散液；

将第二分散液缓慢滴加到第一分散液中，搅拌反应48~64h，烘干、研磨得到混合粉末，将混合粉末在氮气气氛中500~600℃下焙烧6~8h，冷却至室温，洗涤后烘干、研磨得到改性碳纳米管。

2.根据权利要求1所述的一种促进神经干细胞增殖的方法，其特征在于，所述扩增培养基包括：高糖DMEM16~18质量份，非必需氨基酸8~9质量份，谷氨酰胺0.6~0.8质量份，β-巯基乙醇0.03~0.05质量份，白血病抑制因子1000U/mL，纳米层状双氢氧化物0.09~0.1质量份。

3.根据权利要求2所述的一种促进神经干细胞增殖的方法，其特征在于，所述扩增培养基包括：高糖DMEM16质量份，非必需氨基酸8质量份，谷氨酰胺0.6质量份，β-巯基乙醇0.03质量份，白血病抑制因子1000U/mL，纳米层状双氢氧化物0.09质量份。

4.根据权利要求1所述的一种促进神经干细胞增殖的方法，其特征在于，取硝酸镍18~20质量份，硝酸铝15~20质量份，氢氧化钠45~50质量份，碳酸钠30~40质量份，碳纳米管18~20质量份。

5.根据权利要求4所述的一种促进神经干细胞增殖的方法，其特征在于，取硝酸镍18质量份，硝酸铝15质量份，氢氧化钠45质量份，碳酸钠30质量份，碳纳米管18质量份。

6.根据权利要求1所述的一种促进神经干细胞增殖的方法，其特征在于，取碳纳米管12~15质量份，钛酸丁酯27~30质量份，钨酸钠9~10质量份，无水乙醇110~120质量份，28%氨水30~40质量份，30%过氧化氢溶液1.5~2质量份。

7.根据权利要求6所述的一种促进神经干细胞增殖的方法，其特征在于，取碳纳米管12质量份，钛酸丁酯27质量份，钨酸钠9质量份，无水乙醇110质量份，28%氨水30质量份，30%过氧化氢溶液1.5质量份。