[发明专利]一种快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于，所述快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法包括以下步骤：

步骤一，在田间进行草地贪夜蛾的捕捉，选择活力好、状态佳，质量为6-8mg的四龄幼虫，将其置于室内饲养箱；

步骤二，对选择的草地贪夜蛾进行饲养，饲养中喂食按照质量份数由玉米粉6-8份、麦麸1-2份、可食用琼脂2-3份、蜂蜜1-2份、葡萄糖2-4份、纯净水6-8份组成的草地贪夜蛾复配饲料；

所述草地贪夜蛾进行饲养包括：

(2.1)将草地贪夜蛾放置于饲养箱中，添加草地贪夜蛾复配饲料饲养草地贪夜蛾至幼虫老熟；

(2.2)将老熟的幼虫放置于添加有潮湿沙壤土的容器中，进行化蛹，同时向容器中添加草地贪夜蛾复配饲料；

(2.3)将草地贪夜蛾蛹从容器中取出，进行除湿，直至草地贪夜蛾蛹羽化，即可得草地贪夜蛾成虫；

步骤三，将双酰胺类杀虫剂用丙酮水溶液进行溶解，配置五个不同浓度的双酰胺类杀虫剂溶液；

步骤四，将步骤二培养的草地贪夜蛾置于培养皿中，分别对不同培养皿中的草地贪夜蛾进行步骤三配制的不同浓度双酰胺类杀虫剂溶液的滴加，一个培养皿中不进行双酰胺类杀虫剂溶液的滴加；

步骤五，将处理后的草地贪夜蛾连同培养皿置于温度为26-29℃，相对湿度为70-80％的环境中进行饲养；

步骤六，分别在饲养48h和96h时进行草地贪夜蛾状态检查，使用棉棒轻触虫体，确定草地贪夜蛾死亡状态和死亡数量；

步骤七，采用Polo Plus 2.0软件进行分析，得到草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗药性；

所述采用Polo Plus 2.0软件进行分析，得到草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗药性包括：

(7.1)获取草地贪夜蛾死亡数量以及致死的双酰胺类杀虫剂浓度数据，并将死亡数量转化为机率值；

(7.2)基于死亡机率值与致死的双酰胺类杀虫剂浓度数据的对数进行毒力回归曲线的绘制；

(7.3)将毒力回归曲线与标准曲线对比，即可得到的草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性；

步骤八，进行草地贪夜蛾基因的相对表达量测定，得到相对表达量在抗性种群中表达量最高的基因；

所述进行草地贪夜蛾基因的相对表达量测定包括以下步骤：

(8.1)进行草地贪夜蛾总DNA的提取以及cDNA的合成；

(8.2)设计荧光定量PCR引物；

(8.3)通过荧光定量PCR检测草地贪夜蛾不同基因的基因表达量；

(8.4)进行相对表达量的计算。

2.如权利要求1所述快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于，所述草地贪夜蛾复配饲料的制备方法为：

(1)将麦麸进行充分研磨，过筛，得到麦麸粉末；

(2)将纯净水进行加热至沸腾，加入可食用琼脂，搅拌，得到琼脂液；

(3)在琼脂液中加入麦麸粉末、玉米粉、葡萄糖，进行搅拌，得到混合物；

(4)在混合物中添加蜂蜜，搅拌均匀，冷却，得到草地贪夜蛾复配饲料。

3.如权利要求1所述快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于，步骤(2.1)中，所述饲养箱内温度为26-29℃，相对湿度为70-80％，光照为25-32Lux；光照时间为17h/d；光照强度为26％。

4.如权利要求1所述快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于，所述双酰胺类杀虫剂包括邻苯二酰胺、邻甲酰氨基苯甲酰胺和间苯甲酰氨基苯甲酰胺类杀虫剂。

5.如权利要求1所述快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于，步骤三中，所述丙酮水溶液中丙酮与水的体积比为1:1.2。

6.如权利要求1所述快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，其特征在于，步骤四中，所述将步骤二培养的草地贪夜蛾置于培养皿中具体为：每个培养皿中盛放两只草地贪夜蛾，共使用六个培养皿。