[发明专利]一种用于检测大肠埃希菌CTX-M基因的荧光定量PCR试剂盒

说明书

一种用于检测大肠埃希菌CTX‑M基因的荧光定量PCR试剂盒，包括含有用于检测CTX‑M‑1群基因的上游引物、下游引物和探针，还含有用于检测CTX‑M‑9群基因的上游引物、下游引物和探针，用于检测CTX‑M‑1群基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，探针的序列如SEQ ID NO.3所示；用于检测CTX‑M‑9群基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.4所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.5所示，探针的序列如SEQ ID NO.6所示。本发明使用的引物、探针具有良好特异性和灵敏度，对遏制细菌耐药具有积极意义。

技术领域：

本发明属于生物工程领域，涉及一种检测试剂盒，具体来说是一种用于检测产超广谱β－内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中CTX-M-1群和CTX-M-9群基因的荧光定量PCR试剂盒。

背景技术：

β－内酰胺类药物是化学结构中具有β－内酰胺环的一大类药物，是目前生产量和使用量最大的抗生素类型之一，包括临床最常使用的青霉素类与头孢菌素类等。近年来，单环β－内酰胺类以及碳青霉烯类也使用的越来越多。随着该类药物的广泛使用，细菌对该类药物的耐药性也日渐严重。国内外对其耐药情况研究也较为广泛，许多国家都发现了不同型的流行菌株。大肠埃希菌是寄居在人和动物肠道中的正常菌群，是临床最常见的一种革兰氏阴性菌，其对β－内酰胺类药物耐药的主要机制之一是产生超广谱β－内酰胺酶(ESBLs)水解失活该类药物。

ESBLs主要包括CTX-M型、TEM型、SHV型和OXA型等多种家族的酶，其中CTX-M是目前全球范围内主要流行的ESBLs型。目前，已发现150多种CTX-M型β－内酰胺酶，根据其基因序列类型，同源性大于95％为同一群CTX-M酶，大致可分为CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-8群、CTX-M-9群、CTX-M-25群和KLUC群6个。其中又以CTX-1群和CTX-9群为全球主要流行群。

目前还没有针对大肠埃希菌中主要流行的CTX-M型的超广谱β-内酰胺酶检测的试剂盒，因此，本发明有助于快速检测产CTX-M型酶的大肠埃希菌，对了解大肠埃希菌对β-内酰胺类药物的耐药情况及耐药基因分布和指导β-内酰胺类药物临床使用及评估耐药风险具有重要意义。

发明内容：

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种用于检测产ESBLs大肠埃希菌中CTX-M-1群和CTX-M-9群基因的荧光定量PCR试剂盒，所述的这种用于检测产ESBLs大肠埃希菌中CTX-M-1群和CTX-M-9群基因的荧光定量PCR试剂盒要解决现有技术中没有合适的试剂盒用于检测常见产CTX-M型超ESBLs大肠埃希菌的现状。

本发明提供了一种用于检测大肠埃希菌CTX-M基因的荧光定量PCR试剂盒，包括含有用于检测CTX-M-1群基因的上游引物、用于检测CTX-M-1群基因的下游引物、用于检测CTX-M-1群基因的探针，用于检测CTX-M-9群基因的上游引物、用于检测CTX-M-9群基因的下游引物、用于检测CTX-M-9群基因的探针，所述的用于检测CTX-M-1群基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述的用于检测CTX-M-1群基因的下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述的用于检测CTX-M-1群基因的探针的序列如SEQ ID NO.3所示，所述的用于检测CTX-M-9群基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.4所示，所述的用于检测CTX-M-9群基因的下游引物的序列如SEQ ID NO.5所示，所述的用于检测CTX-M-9群基因的探针的序列如SEQID NO.6所示。

进一步的，还含有阴性对照、阳性对照。

进一步的，还含有聚合酶链式反应试剂、Taq DNA聚合酶。

本发明中，大肠埃希菌CTX-M-1的序列为：