[发明专利]用于高效检测新型冠状病毒的RAA-CRISPR扩增引物组、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202010898296.9 | 申请日： | 2020-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN112080587A | 公开（公告）日： | 2020-12-15 |
| 发明（设计）人： | 薛俊欣;李健;熊炜;张强;蒋原;申进玲;黄忠荣 | 申请（专利权）人： | 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海领誉知识产权代理有限公司 31383 | 代理人： | 车超平 |
| 地址： | 200135 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 高效 检测 新型 冠状病毒 raa crispr 扩增 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于高效检测新型冠状病毒的RAA-CRISPR扩增引物组，其特征在于，所述引物组为包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和/或SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5的核酸序列，或与其同源性大于90％的核酸序列。
2.一种用于高效检测新型冠状病毒的RAA-CRISPR扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的RAA-CRISPR扩增引物组。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括水化缓冲液和醋酸镁。
4.一种高效检测新型冠状病毒的方法，其特征在于，包括采用权利要求1-3任意一项所述的RAA-CRISPR扩增引物组或RAA-CRISPR扩增试剂盒进行新型冠状病毒的核酸扩增。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤：
1)向扩增后的产物中加入Cas13a酶、crRNA、T7转录酶、NTP、探针和缓冲液制成检测液；
2)检测所述检测液的荧光强度，根据荧光曲线判断样品中是否含有新型冠状病毒。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述核酸扩增的方法为重组酶介导等温核酸扩增。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，重组酶介导等温核酸扩增的条件为：37℃、30min。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤1)与步骤2)之间还包括：向扩增后的产物中加入苯酚氯仿纯化扩增产物。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述荧光强度的检测仪器包括恒温扩增仪、酶标仪中的任意一种。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，收集荧光的时间不少于10min。
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