[发明专利]用于2019新型冠状病毒核酸提取的组合物、试剂盒、用途及其方法

说明书

本发明属于分子生物学检测领域，具体地，属于病毒核酸提取的领域。本发明请求保护一种提取2019新型冠状病毒核酸的组合物，所述组合物包括：提取溶液1：盐酸胍、硫氰酸胍、尿素、莎梵婷、氯化钾、氯化锂、十二烷基硫酸三乙醇胺、NP‑40、曲拉通X‑100，和异丙醇；提取溶液2：Tris‑HCl、氯化锂、醋酸钠、十二烷基硫酸三乙醇胺、NP‑40、SDS，和乙醇；以及提取溶液3：Tris‑HCl、氯化钠，和乙醇。使用本发明的组合物，能够特异性的提高2019新型冠状病毒的核酸提取和纯化的灵敏度，其检测限可达10拷贝/mL。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，具体地，属于病毒核酸提取的领域，更具体地，属于2019新型冠状病毒核酸提取领域。

背景技术

核酸是各类生命的最基本物质之一，不仅起着储存和传递遗传信息的作用，在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中也起着决定性的作用。自1869年瑞士物理学家Friedrich Miescher首次从白细胞中分离出核酸以来，全球各国的研究者们在核酸提取和纯化方法上进行了不懈的研究探索。核酸提取的传统方法包括酚抽提法、碱裂解法、CTAB抽提法、煮沸法等。自1979年Vogelstein和Gillespie首次将玻璃纤维（主要成分SiO2）用于回收琼脂糖凝胶中的DNA片段以来，以固相载体为基础的新型核酸提取方法便被发展起来，包括苯酚-氯仿抽提法、离心柱提取法、玻璃珠吸附法及微纳米磁珠提取法。

苯酚-氯仿抽提核酸苯酚氯仿提取核酸是利用酚是蛋白质的变性剂的特性，使蛋白质变性，裂解释放核酸，而核酸易溶于水，却不溶于异丙醇等有机溶剂。根据核酸、蛋白溶于不同的试剂层，在不同液层内抽取所需的成分，经多次洗涤后获得核酸。该方法的缺点是由于使用了苯酚、氯仿等有毒挥发性试剂，对人员健康有较大影响，而且核酸的回收率较低，损失量较大。另外，由于操作步骤复杂，不同实验人员之间的操作重复性差。优点是使用了实验室常见的试剂且成本比较低廉。

离心柱法主要原理是将对核酸有吸附作用的官能基团固定在吸附模上，在高盐环境下，核酸可被吸附在吸附膜上，而其他杂质如蛋白质、代谢产物等则会被离心沉淀与核酸分离，通过反复离心洗涤，最终洗脱核酸，达到核酸提取与纯化的目的。离心柱法核酸提取的优点是比传统酚氯法提取的纯度更高，而且可进行微量操作，以其低廉的价格和相对便捷的操作，逐渐取代了传统核酸提取方法，被高校科研机构等市场普遍接受。其缺点是离心柱法提取需要反复离心，不便于自动化、高通量操作，特别是在疾病检测等分子诊断领域，离心柱法提取需要大量的操作人员及仪器设备。当面对突发疫情时，更是需要有高通量、自动化的设备与方法才能更有效准确的监测疫情、控制疫情。

磁珠法依据与吸附膜相似的原理，在磁珠表面修饰可以吸附核酸的特定官能团，通过不同的溶液环境，达到裂解、结合、洗涤和洗脱的目的。同时利用磁珠自身的磁性，在外磁场的作用下可以方便的实现定向移动与富集，从而达到核酸与杂质分离的目的，进而实现对目标物质的分离纯化，获得纯化核酸。该技术能够从动植物组织、体液、环境等样本中分离获得高纯度的核酸。适用于PCR、Q-PCR、分子杂交、测序等下游应用。因其载体磁珠操作友好性高、核酸纯度高、自动化实现简单，在分子克隆、分子杂交、分子诊断等领域有广泛的应用。磁珠法是纳米科技与生物技术的完美结合，在临床分子诊断方面有很多优势：容易实现自动化、高通量操作，可满足当前临床分子诊断高通量操作的要求；操作简单、用时短，无需反复离心等操作；不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂，安全无毒，对实验操作人员的伤害少；磁珠与核酸的特异性结合使得其有非常高的核酸提取效率，更能满足临床分子诊断对于某些检测灵敏度要求非常高的项目需求。

随着研究的不断深入，基于磁珠法技术的核酸提取也变得多种多样，但是不同的磁珠修饰方式、不同的核酸吸附环境等，对于磁珠法提取核酸的效率和稳定性有较大的影响，这也是造成市面上的磁珠法核酸提取产品虽然数量非常多，但其质量却良莠不齐的原因之一。