[发明专利]一种干细胞冻存液及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种干细胞冻存液，其特征在于，包括以下组份：按质量百分比，

DMSO 0～20％、甘油1～2％、海藻糖1～2％、乙醇2～5％、N-十二烷酰基肌氨酸0.05～0.07％、磷酸钙0.7～1.0％、猪苓酸C 0.03～0.06％、葫芦巴碱0.02～0.05％、1,8-桉叶素0.01～0.04％、余量是DMEM培养基。

2.根据权利要求1所述的干细胞冻存液，其特征在于，包括以下组份：按质量百分比，DMSO 0～5％、甘油1～2％、海藻糖1～2％、乙醇2～3％、N-十二烷酰基肌氨酸0.05～0.07％、磷酸钙0.7～1.0％、猪苓酸C 0.03～0.04％、葫芦巴碱0.03～0.05％、1,8-桉叶素0.02～0.03％、余量是DMEM培养基。

3.根据权利要求1所述的干细胞冻存液，其特征在于，包括以下组份：按质量百分比，DMSO 0％、甘油2％、海藻糖1％、乙醇3％、N-十二烷酰基肌氨酸0.06％、磷酸钙0.8％、猪苓酸C 0.04％、葫芦巴碱0.05％、1,8-桉叶素0.02％、余量是DMEM培养基。

4.根据权利要求1所述的干细胞冻存液，其特征在于，所述干细胞包括胚胎干细胞、成体干细胞。

5.根据权利要求1所述的干细胞冻存液，其特征在于，所述干细胞为脂肪间充质干细胞。

6.权利要求1所述的干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将猪苓酸C与磷酸钙混合均匀，得混合物A；将N-十二烷酰基肌氨酸、1,8-桉叶素、葫芦巴碱与乙醇混合，20～25℃且100～150rpm搅拌条件下加入混合物A和/或DMSO，混合5～10min；依次加入甘油、海藻糖和DMEM培养基，混匀即得干细胞冻存液。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将猪苓酸C与磷酸钙混合，在30～35℃条件下均匀，保温备用。

8.权利要求1所述的干细胞冻存液的使用方法，其特征在于，将细胞悬液与干细胞冻存液混匀，装入冻存管中，冻存管先在0～2℃放置30～35min，然后-30～-35℃放置60～70min，-60～-65℃放置9～10h，之后采用-196℃液氮进行冻存。

9.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于，细胞悬液与干细胞冻存液混匀后，细胞密度为4×10⁶/ml。