[发明专利]一种封闭液用牛血清的制备方法

说明书

本发明公开了一种封闭液用牛血清的制备方法，过程包括：取成牛血清，并对其进行预处理、对预处理后的成牛血清依次进行深层过滤、沉淀，得澄清后的成牛血清、对澄清后的成牛血清离心，取上清、对所得上清进行亲和柱层析，得层析液、对所得层析液用0.01‑0.05μm滤膜进行过滤，灭菌，得封闭液用牛血清。本发明制备的封闭液降低了酶联免疫试剂盒检测时的背景值，提高了检测限度。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，更具体地说是涉及一种封闭液用牛血清的制备方法。

背景技术

酶联免疫技术是检测抗原或抗体常用的方法，其基本原理是使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，然后用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

由于试剂盒中的固相载体可与检测抗原或抗体结合，所以为了避免固相载体与待检测的抗原或抗体结合，需要使用封闭液与固相载体的结合。目前，封闭液主要由成牛血清构成，但是成牛血清中含有大量的免疫球蛋白，免疫球蛋白具有类似免疫功能的抗体，若其大量存在于封闭液中会影响对待测抗原或抗体的定量和定性检测结果，因此，降低成牛血清中免疫球蛋白的量很必要。

因此，如何提供一种封闭液用牛血清是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明采用澄清、亲和柱层析、过滤等方式去除了胎牛血清中的免疫球蛋白，降低了酶联免疫试剂盒检测时的背景值，提高了检测限度。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

1)预处理：取成牛血清，并对其进行预处理，得预处理后的成牛血清；

2)澄清：对预处理后的成牛血清依次进行深层过滤、沉淀，得澄清后的成牛血清；

3)离心：对澄清后的成牛血清离心，取上清；

4)亲和柱层析：对所得上清进行亲和柱层析，得层析液；

5)过滤：对所得层析液用0.01-0.05μm滤膜进行过滤，灭菌，得封闭液用牛血清。

以上技术方案达到的技术效果是：成牛血清中含有BSA蛋白、免疫球蛋白、血细胞、激素类物质、离子等，以深层过滤器对其进行深层过滤可除去大分子物质；离心后，可去除部分大分子蛋白质；亲和柱层析法可使部分免疫球蛋白留在柱中，由于免疫球蛋白主要包括IgG、IgM和IgA，其分子量分别为150kd、1000kd和400kd，而BSA蛋白的分子量在60-75kd之间，因此采用0.01-0.05μm滤膜进行过滤，可将绝大多数免疫球蛋白截留在膜上，以此达到去除免疫球蛋白的目的，从而，防止了免疫球蛋白与待测抗原或抗体的吸附反应，提高了试剂盒的检测限度。

作为本发明优选的技术方案，步骤1)中，所述预处理为：对成牛血清经连续流离心机在8000rpm下离心10-15min，去掉血细胞。

以上技术方案达到的技术效果是：连续流离心机处理量大，时间短，人工成本低，可以大规模处理，成牛血清中的血细胞在离心后，会沉淀，达到了去除血细胞的目的。

作为本发明优选的技术方案，步骤2)中，所述沉淀为将滤液调至pH值为6.0，采用聚丙烯酰胺进行沉淀。