[发明专利]构建RRBS文库的Y型接头、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种构建RRBS化文库的Y型接头，其特征在于，所述Y型接头包括：

甲基化接头1：5'-acactctttccctacacgacgctcttccgatctn1-3'；

甲基化接头2：5'-n2n1’agatcggaagagcacacgtctgaactccagtcac-3'；

其中，所述甲基化接头1和所述甲基化接头2退火形成所述Y型接头，所述甲基化接头1和所述甲基化接头2中的碱基c均为甲基化修饰的c，n1和n1’为互补配对的保护碱基序列，n1或n1’的碱基数目为6～12个，n2为酶切位点粘性末端碱基，n2的碱基数目为1～5个。

2.根据权利要求1所述的Y型接头，其特征在于，所述保护碱基序列为6～8个随机碱基形成的序列。

3.根据权利要求1所述的Y型接头，其特征在于，所述n2的碱基数目为2～4个。

4.根据权利要求1所述的Y型接头，其特征在于，所述酶切位点粘性末端碱基为MspI、BglII、XmaI或TaqI酶切产生的末端碱基。

5.根据权利要求1所述的Y型接头，其特征在于，

所述甲基化接头1为：5'-acactctttccctacacgacgctcttccgatctatgcag-3'；

所述甲基化接头2为：5'-cgctgcatagatcggaagagcacacgtctgaactccagtcac-3',

其中，所述甲基化接头1和所述甲基化接头2中的碱基c均为甲基化修饰的c。

6.一种构建RRBS文库的方法，其特征在于，所述方法包括：

采用内切酶及权利要求1-5中任一项所述的Y型接头，对待测基因组DNA进行边酶切边连接接头，得到带接头片段；

对所述带接头片段进行片段长度选择，得到目标长度片段；

对所述目标长度片段进行CT转化，得到转化片段；

对所述转化片段进行PCR扩增，得到所述RRBS文库。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，采用电泳切胶回收的方法对所述带接头片段进行片段长度选择，得到所述目标长度片段。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，对所述转化片段进行PCR扩增后，还包括对PCR扩增产物进行纯化，从而得到所述RRBS文库。

9.一种构建RRBS文库的试剂盒，所述试剂盒包括Y型接头，其特征在于，所述Y型接头为权利要求1-5中任一项所述的Y型接头。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸内切酶，所述核酸内切酶产生的粘性末端的碱基与所述Y型接头中n2所示的酶切位点粘性末端碱基相同。