[发明专利]筛选能够表达期望产物细胞株的方法

权利要求书

1.筛选能够表达期望产物细胞株的方法，其特征在于，包括：

a）将细胞池稀释后接种于细胞芯片中；

所述细胞芯片具有分隔的区室；

所述细胞池中含有能够表达期望产物的细胞；

b）对所述细胞芯片进行扫描，确认并记录拥有单克隆细胞的孔；

所述期望产物为分泌性物质或附着于细胞膜表面的物质；

c）将固相支持物与所述细胞芯片的细胞孔面接触，以使得所述固相支持物上偶联的具有与所述期望产物结合能力的分子捕获所述期望产物形成缀合物；

对所述缀合物中的所述期望产物进行定量检测，以确定芯片上每一个拥有单克隆细胞的孔的所述期望产物的表达量；

d）分离所述期望产物的表达量高的单克隆；

其中，

步骤b）具体包括：

对所述细胞芯片进行扫描，获取所述细胞芯片中的细胞于明场和暗场下的图像，将所述图像中的细胞切割为单细胞图片，对所述单细胞图片进行分析以确认并记录拥有单克隆细胞的孔；

将所述图像中的细胞切割为单细胞图片的方法包括：

将所述明场和/或暗场图像灰度化，读取细胞灰度图像；

对所述细胞灰度图像进行直方图均衡化操作，得到均衡化图像；

对所述均衡化图像进行形态学操作，得到形态学图像；所述形态学操作包括顶帽操作和梯度操作；

通过边缘检测算法检测所述形态学图像中的细胞边缘，得到细胞边缘图像；

对所述细胞边缘图像进行二值化处理，得到二值化细胞图像；

根据所述二值化细胞图像进行细胞分割，得到细胞分割图像。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缀合物中具有用于显示信号强度的指示剂；

所述方法还包括：

对所述缀合物中的所述期望产物进行定量检测或对所述指示剂进行定量检测之后，在暗场下检测所述细胞分割图像中所述期望产物或所述缀合物中所述指示剂的强度，并对其进行排序。

3.根据权利要求1~2任一项所述的方法，其特征在于，若所述期望产物的表达量高的单克隆未在步骤b）所确认的孔中，则根据明场和/或暗场下所获取的图像将细胞分割提取出来。

4.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其特征在于，所述分泌性物质选自蛋白质、核酸、多糖以及外泌体；

所述附着于细胞膜表面的物质选自蛋白质和多糖。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述蛋白质选自酶、激素、神经递质、血清蛋白以及抗体。

6.根据权利要求1~2、5任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞芯片上不同位置的孔列阵具有可供辨识的识别标记。

7.根据权利要求1~2、5任一项所述的方法，其特征在于，所述固相支持物上具有可供辨识其与细胞芯片上不同孔的接触位置的识别标记。

8.根据权利要求1~2、5任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：

对步骤d）所述单克隆进行扩增；和/或

筛选出表达所述期望产物能力更稳定的单克隆。