[发明专利]一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，包括粘和背板(1)，其特征在于，所述粘和背板(1)上水平向依次粘贴有样品接触垫(2)、纳米金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水动力垫(5)；

所述样品接触垫(2)一侧叠盖纳米金垫(3)，纳米金垫(3)叠盖硝酸纤维素膜(4)，且硝酸纤维素膜(4)另一端为吸水动力垫(5)所叠盖，各部分叠盖的宽度1.9-2.1mm；

所述纳米金垫(3)含有甲胺磷核酸适配体(A)修饰的纳米金粒子和质控DNA(B)修饰的纳米金粒子；

所述硝酸纤维素膜(4)上设有检测线(6)和质控线(7)，检测线(6)含有能够捕获甲胺磷核酸适配体(A)的适配体DNA探针(C)，质控线(7)含有能够捕获质控DNA(B)的质控DNA探针(D)。

2.如权利要求1所述的一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，其特征在于：所述适配体DNA探针(C)与甲胺磷通过竞争结合甲胺磷核酸适配体(A)修饰的纳米金粒子，实现检测目的；

a)检测液中不存在甲胺磷时，检测线(6)显色、质控线(7)显色；

b)检测液中存在甲胺磷时，检测线(6)不显色或色度降低、质控线(7)显色。

3.基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、样品接触垫(2)的制备：聚酯纤维膜浸入TBS缓冲液30min，随后置于37℃恒温干燥箱中烘干，干燥条件保存、备用；

S2、纳米金垫(3)的制备：分别将巯基标记的甲胺磷核酸适配体(A)和巯基标记的质控DNA(B)通过Au-S键组装于纳米金表面，二者等比例混合，加入玻璃纤维膜，37℃环境下干燥，密封，制得纳米金垫(3)；

S3、硝酸纤维素膜(4)的制备：在所述硝酸纤维素膜(4)接近纳米金垫处用链亲和素(9)偶联生物素(8)标记的适配体DNA探针(C)划出检测线(6)；在接近吸水动力垫(5)处用链亲和素(9)偶联生物素(8)标记的质控DNA探针(D)划出质控线(7)；

S4、试纸的组装：在粘和背板(1)上依次叠盖粘贴样品接触垫(2)、纳米金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水动力垫(5)，得到检测试纸。

4.如权利要求3所述的一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，其特征在于：所述步骤S4中，样品接触垫(2)和吸水动力垫(5)分别粘贴在粘和背板(1)两侧，且样品接触垫(2)一侧叠盖纳米金垫(3)，纳米金垫(3)叠盖硝酸纤维素膜(4)，且硝酸纤维素膜(4)另一端为吸水动力垫(5)所叠盖。

5.如权利要求3所述的一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，其特征在于：所述步骤S2中，巯基标记的甲胺磷核酸适配体(A)序列为：

5′-SH-(CH2)6-GGGTCAATACCTGCAATTACCACATTTAAAGGCAA-3′。

6.如权利要求3所述的基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，巯基标记的质控DNA(B)序列为：

5′-SH-(CH2)6-TTTTTTTTTTTTTTT-3′。

7.如权利要求3所述的一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，其特征在于：所述步骤S3中，生物素标记的适配体DNA探针(C)序列为：

5′-GTAATTGCAGGTATT-biotin-3′。

8.如权利要求3所述的一种基于核酸适配体分子竞争结合的甲胺磷快速检测试纸，其特征在于：所述步骤S3中，生物素标记的质控DNA探针(D)序列为：

5′-AAAAAAAAAAAAAAA-biotin-3′。