[发明专利]基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括AFB1单克隆抗体、生物素标记的AFB1核酸适配体、Cy5标记的cDNA和链霉亲和素化的MNPs、盐酸溶液和K₄Fe(CN)₆；该链霉亲和素化的MNPs偶联生物素标记的AFB1核酸适配体与Cy5标记的cDNA杂交形成的双链DNA后得到检测探针；以 MNPs为前体物，在盐酸消解下释放出 Fe³⁺，K₄Fe(CN)₆ 与 Fe³⁺完全反应后得到原位生长的PBNPs。

2.如权利要求1所述的基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的AFB1核酸适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.如权利要求1所述的基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒，其特征在于，所述Cy5标记的cDNA的序列如SEQ ID NO：2所示。

4.如权利要求1所述的基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括96孔聚苯乙烯微孔板、PBS缓冲液、终止缓冲液及显色底物。

5.一种基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测方法，其特征在于，该方法步骤如下：

（1）将生物素标记的AFB1核酸适配体与Cy5标记的cDNA按体积比1:1杂交，形成双链DNA后加入到链霉亲和素化的MNPs溶液中，以通过生物素与链霉亲和素特异性结合，aptamer/cDNA修饰到MNPs表面，得到检测探针aptamer@cDNA@MNPs；

（2）将AFB1单克隆抗体用PBS缓冲溶液稀释后加入到96聚苯乙烯微孔板中，完成抗体包被；并用含牛血清白蛋白的PBS缓冲溶液封闭微孔板上的非特异性活性位点；

（3）向微孔板中分别加入样品溶液以及浓度梯度的AFB1标准溶液，再加入步骤（1）制得的检测探针、体积比为1:3的盐酸溶液和K₄Fe(CN)₆溶液进行超声反应；

（4）依据不同检测要求根据AFB1标准溶液检测结果绘制标准曲线，将样品溶液检测结果对应绘制的标准曲线，即可对样品溶液中的AFB1进行检测分析。

6.如权利要求5所述的基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测方法，其特征在于，所述步骤（4）中的检测要求包括光热检测、比色半定量检测及荧光检测。

7.如权利要求6所述的基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测方法，其特征在于，所述光热检测中是用808 nm的红外激光照射步骤（3）中超声反应后的微孔板，通过温度与AFB1标准溶液浓度之间的关系绘制标准曲线。

8.如权利要求6所述的基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测方法，其特征在于，所述比色半定量检测中是于808 nm红外激光照射过的步骤（3）中超声反应后的微孔板中加入双氧水溶液和TMB溶液，通过反应溶液在652 nm处的紫外吸收值与AFB1标准溶液浓度之间的关系绘制标准曲线。

9.如权利要求6所述的基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测方法，其特征在于，所述荧光检测中是将步骤（3）中超声反应后的微孔板中的溶液离心，取上清液；通过上清液的荧光强度与AFB1标准溶液浓度之间的关系建立标准曲线。

10.如权利要求5所述的基于PBNPs原位生长调控多模信号输出的黄曲霉毒素B1检测方法，其特征在于，所述步骤（3）中AFB1标准溶液的梯度浓度为10^-14-10^-7 g/mL。