[发明专利]适用于大规模质粒DNA生产的纯化方法

权利要求书

1.用于质粒纯化的阴离子交换层析介质，其特征在于，所述阴离子交换层析介质为：配体为DEAE(二乙胺基乙基)，配基为交联聚甲基丙烯酸酯聚合物小球。

2.根据权利要求1所述的阴离子交换层析介质，其特征在于，所述配基密度为0.29-0.35mmol cl^-1/ml填料。

3.DEAE阴离子交换层析介质在质粒纯化中的应用。

4.包含质粒的混合物分离的方法，其特征在于，所述方法为以权利要求1或2所述的阴离子交换层析介质为固定相进行离子交换层析。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述混合物包括RNA、质粒、内毒素、大肠杆菌基因组和大肠杆菌宿主蛋白。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述方法具体为：将所述混合物上样至离子交换层析柱；上样结束后用平衡缓冲液冲洗层析柱冲洗3-5个柱体积直至275-285nm处吸收值降至近基线水平，不收集上样和洗柱过程的峰；用洗脱缓冲液进行洗脱，冲洗3-5个柱体积，收集该峰，至275-285nm处吸收值降至近基线水平时，停止收集。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述平衡缓冲液为20-150mM MOPs或/和Tris或/和HEPES或/和PIPES，pH值为6.5-7.5。

8.大规模质粒DNA的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：(1)将原料利用权利要求4-6任一所述的方法进行处理收集洗脱液；(2)所述洗脱液经缓冲液置换后进经亲和层析进行处理得纯化质粒DNA。

9.根据权利要求8所述的纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述缓冲液为20-150mMMOPs或/和Tris或/和HEPES或/和PIPES，pH值为7.0-8.0。

10.根据权利要求8或9所述的纯化方法，其特征在于，将步骤(2)中所述的纯化质粒DNA进行后处理，所述后处理具体为：将所述纯化质粒DNA使用孔径30-300kD的模包或中空纤维柱对洗脱峰收集组分进行浓缩换液，将缓冲液置换为低电导的磷酸盐缓冲液或TE缓冲液中，然后将换液后的质粒DNA溶液除菌过滤得药用质粒DNA。