[发明专利]一种用于检测KL-6的乳胶颗粒制备方法及其应用

说明书

本发明公开用于检测KL‑6乳胶颗粒的制备方法，涉及生物分析技术领域，包括(1)用反应缓冲液悬浮乳胶微球，得到乳胶微球溶液；(2)向步骤(1)的反应体系加入KL‑6抗体；(3)持续搅拌反应；(4)向步骤(3)的反应体系依次加入EDC.HCl溶液和NHS溶液；(5)向步骤(4)的反应体系加入封闭液，反应后离心；(6)向步骤(5)的反应体系加入储存液；(7)过夜保存，获得胶乳试剂。本发明的有益效果是其所制备的乳胶颗粒用于乳胶增强免疫比浊法测定KL‑6时，能够有效提高灵敏度和特异性，并且抗干扰性强，能够有效降低干扰物，例如，胆红素，血红蛋白，甘油三酯，抗坏血酸，脂肪乳剂，类风湿因子的干扰。

技术领域

本发明涉及生物分析技术领域，具体涉及一种用于特异性检测KL-6的乳胶颗粒的制备方法及其应用。

背景技术

涎液化糖链抗原(Kerbs von den Lungen-6，KL-6)是分类于第9族肺细胞抗原，相对分子质量约200000的糖蛋白。主要表达在肺泡Ⅱ型上皮细胞，在正常肺组织和终末细支气管上皮细胞只有极少量表达，而在肺泡I型上皮细胞上不表达。KL-6在间质性肺疾病患者中此项指标较健康人和其他呼吸系统疾病患者显示出有意义的升高，其表达异常与肺间质疾病密切相关，是一类肺间质性疾病(interstitial lung disease，ILD)的生物标志物。

目前，临床上诊断ILD常用高分辨率计算机断层扫描、支气管镜检查和(或)肺活检来确诊ILD，用肺功能检测来监控疾病活动性和ILD患者预后。然而，这些检查需要特定的医疗设备，且会给患者带来较强的不适感。

目前KL-6的检测方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、荧光层析法或者电化学发光法，ELISA法操作相对繁琐、检测时间长，电化学发光法需要特殊仪器且成本较高。而在生化分析仪上利用胶乳增强免疫比浊法(LEIA)测定KL-6，灵敏度更高，线性范围更广，操作也相对简单，且该测试方法可以在各种生化分析仪上使用，具有很强的适用性。但现有技术产品不同批次试剂之间检测结果差异较大，导致结果不稳定。

发明内容

本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种用于特异性检测KL-6的乳胶颗粒的制备方法，以解决现有技术产品不同批次时间之间检测结果差异大的问题。

本发明的技术解决方案如下：

一种用于检测KL-6乳胶颗粒的制备方法，包括如下步骤：

(1)用反应缓冲液悬浮乳胶微球，得到乳胶微球溶液；

(2)向步骤(1)的反应体系加入KL-6抗体；

(3)持续搅拌反应；

(4)向步骤(3)的反应体系依次加入所述EDC.HCl溶液和NHS溶液；

(5)向步骤(4)的反应体系加入封闭液，反应后离心；

(6)向步骤(5)的反应体系加入储存液；

(7)过夜保存，获得胶乳试剂。

本申请中通过在制备过程中，采用依次向乳胶微球溶液中加入EDC.HCl溶液和NHS溶液，使得反应更加充分，能够显著提高所制备复合物的灵敏度，敏感性，抗干扰性以及稳定性。

本申请对KL-6抗体没有特殊要求，其可以为商业化抗体，或通过骨髓瘤杂交细胞进行制备。优选为单克隆抗体。