[发明专利]一种鸭短喙侏儒综合征蛋黄抗体的制备方法

说明书

本发明涉及一种鸭短喙侏儒综合征蛋黄抗体的制备方法，包括如下步骤：1)、用鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗免疫产蛋鸡，每隔14天加强免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取样检测，琼扩效价达到1:32以上，留蛋使用；2)、进行蛋清蛋黄分离；3)、分离蛋黄加入7倍的去离子水稀释、搅拌均匀；4)、调节混合后蛋黄液pH值到4.5，蛋黄溶液降温到4℃；5)、离心，上清液即为提纯后的卵黄抗体液体。本发明提取工艺制备用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体，生产时间短，工艺简单，大大降低了人工成本和时间成本。克服了常用提取方法酸沉、辛酸除脂法的生产时间长(约48h‑72h)，工艺复杂，成本高的缺点。

技术领域

本发明涉及生物制品制备领域；尤其涉及一种鸭短喙侏儒综合征蛋黄抗体的制备方法。

背景技术

自2014年以来，一种由新型鹅源鸭源细小病毒(novel duck parvovirus，NDPV)引起的鸭病在国内部分鸭群中不断发生。病鸭主要表现为鸭喙萎缩、舌头肿胀脱出、跛行瘫痪，生长迟缓和侏儒症，根据发病临床特征将该病命名为鸭短喙-侏儒综合征(duck shortbeak and dwarfism syndrome，DSBDS)。2014年以前，未见该病大面积发生与流行的报道，2014年后全国多地发生，并迅速蔓延，尤其是肉鸭养殖比较密集的地区，给我国养鸭业造成严重的经济损失，现已引起高度的关注。该病可发生于多种肉鸭，如樱桃谷鸭、半番鸭、番鸭、麻鸭、白鸭及褐莱鸭等。发病日龄在7～40日龄，日龄越小，发病率越高。发病率在5％～20％之间，严重者达40％左右，死亡率低于10％。该病既可垂直感染也可水平传播。

卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk,IgY):通过免疫接种产蛋母鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体；当卵细胞分泌进入输卵管时，流经输卵管的血液中含有的特异性抗体(主要是IgA和IgM)进入卵清中，形成卵清抗体。血清抗体移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而血清抗体可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的抗体。与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中移行的时间较短，因而卵清抗体含量极微。卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种针对新发的鸭短喙侏儒综合征进行预防、治疗的精制卵黄抗体的制备方法。这种卵黄抗体的制备方法比传统酸沉、辛酸除脂需要时间更短，可更快速、更经济的获取卵黄抗体。针对鸭短喙侏儒综合征的卵黄抗体可有效补充市场新发疾病相关治疗、预防药物的空白。

本发明采用的技术方案为：

一种用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体的制备方法，包括如下步骤：

1)、用鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗免疫产蛋鸡，每隔14天加强免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取样检测，琼扩效价达到1:32以上，留蛋使用；

2)、进行蛋清蛋黄分离；

3)、分离蛋黄加入7倍的去离子水稀释、搅拌均匀；

4)、调节混合后蛋黄液pH值到4.5，蛋黄溶液降温到4℃；

5)、离心，上清液即为提纯后的卵黄抗体液体。

优选地，所述鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗的制备工艺为：将SBDS毒株用鸭胚成纤维细胞扩增，培养，然后浓缩，保证浓缩后病毒毒价均为1X10^7.0TCID₅₀以上，甲醛灭活，即为所需抗原(免疫用水相)；利用灭活疫苗一般制备工艺进行乳化，即得到鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗。