[发明专利]一种利用土星轮头酵母制备(S)-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇的方法

权利要求书

1.一种利用土星轮头酵母制备(S)-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇的方法，其特征在于所述的方法为：以土星轮头酵母（Cyberlindnera saturnus）CCTCC NO: M2019215经发酵培养获得的湿菌体为酶源，以3,5-双三氟甲基苯乙酮为底物，以葡萄糖为辅助底物，于0.1 M，pH 7.0的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液中构成转化体系，在25~45℃、100-200rpm条件下进行转化反应30-36h，反应结束后将转化反应液进行分离纯化，获得(S)-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇；所述湿菌体的用量以缓冲液体积计为50 g/L，所述底物的初始加量以缓冲液体积计为25.61-51.23 g/L；所述葡萄糖添加量为50 g/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述转化体系由酶源、底物、辅助底物和天然低共熔溶剂组成；所述天然低共熔溶剂的种类及摩尔比为下列之一：甜菜碱:葡萄糖:甘油=1:1:1、甜菜碱:赖氨酸=1:2、L-肉碱:赖氨酸=1:2、L-脯氨酸:赖氨酸=1:1、甜菜碱:谷氨酸=1:1、L-脯氨酸:赖氨酸=1:1、L-脯氨酸:异丙醇=1:1、甜菜碱:异丙醇=1:1、甜菜碱:丙氨酸=1:1。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述天然低共熔溶剂质量加量以缓冲液体积计为5～20 g/L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述转化体系由酶源、底物、辅助底物、天然低共熔溶剂和表面活性剂组成，所述表面活性剂为吐温-80，吐温-60，吐温-20，司盘-80或司盘-20。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述表面活性剂的添加量以缓冲液体积计为1～15g/L。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述酶源按如下方法制备：（1）斜面培养：将土星轮头酵母（Cyberlindnera saturnus）CCTCC NO: M2019215接种至斜面培养基，30℃培养24 h，获得斜面菌种；斜面培养基终浓度组成为：葡萄糖15 g/L，蛋白胨7.5 g/L，酵母膏6g/L，(NH₄)₂SO₄ 3 g/L，KH₂PO₄ 1.5 g/L，NaCl 0.75 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.75 g/L，琼脂粉15~20 g/L，溶剂为水，pH 6.5；

（2）种子培养：将步骤（1）制备得到的斜面菌种接种至种子培养基中，25~30℃、150~250rpm培养10~24 h，获得种子液；种子培养基终浓度组成为：葡萄糖15 g/L，蛋白胨20 g/L，酵母膏10 g/L，(NH₄)₂SO₄ 2 g/L，KH₂PO₄ 2 g/L，NaCl 1 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L，溶剂为水，pH 6.5；

（3）发酵培养：将步骤（2）制备得到的种子液以体积浓度8%的接种量接种至发酵培养基中，初始pH值7.5，摇瓶装液量为90 mL/250 mL锥形瓶，培养温度30℃、摇床转速200 rpm，培养时间32 h，发酵结束后，将发酵液离心，所得沉淀用0.1 M、pH 7.5磷酸缓冲液洗涤，收集湿菌体，即为酶源；发酵培养基终浓度组成为：葡萄糖34.36 g/L，酵母膏14.89 g/L，NH₄Cl30.34 g/L，KH₂PO₄ 1.01 g/L，CaCl₂ 0.11 g/L，溶剂为水，pH 7.5。