[发明专利]适应全悬浮细胞培养的培养基及其制备方法和应用

说明书

一种适用于全悬浮培养基的培养基，适用于包括基础代谢物、核苷酸、维生素、无机盐、抗细胞结团剂、剪切力保护剂、流感病毒增殖促进剂和其他化学成分明确的添加物。本发明的培养基，化学组分完全明确，不含有水解物，且不含有任何动物源成分，包括动物源蛋白(如：胰岛素和转铁蛋白)等，质量可控，重复性好，能适用于全悬浮细胞培养，还能将贴壁细胞驯化为单个悬浮细胞，显著提高细胞密度。

技术领域

本发明涉及一种用于生产生物制品的组合物，尤其涉及一种培养细胞的培养基，应用于全悬浮细胞培养和MDCK细胞培养。

背景技术

70多年以来，鸡胚一直是流感疫苗的传统生产基质，然而因其供应不足、安全性、批次差异性等问题，采用动物细胞培养技术来生产流感疫苗近年来得到了飞速的发展。

MDCK（Mardin-Darby canine kidney）细胞是目前公认的最适于扩增甲型和乙型流感病毒的细胞基质之一，生产工艺按照细胞性质可分为贴壁培养工艺和悬浮培养工艺。对于贴壁细胞培养工艺来说，血清的使用会造成培养工艺的复杂性和批次间不稳定性；细胞在微载体上的贴附生长易受到培养基和培养环境的影响，细胞密度也通常受到贴壁面积的制约；需要添加额外的胰酶使细胞脱离微载体，增加了操作复杂性。

因此，通过无血清悬浮培养MDCK细胞来制备流感疫苗越来越得到研究者和疫苗生产企业的青睐。目前，国内仍十分缺乏利于MDCK悬浮细胞高效生长的商业化无血清培养基，少量的现有技术所提供的MDCK无血清培养基中因培养基组分的不合理设计导致细胞结团；且组分中均含有转铁蛋白、胰岛素等动物源成分，价格昂贵。另外大多培养基中含有植物类或动物类水解物，培养基组分并不明确，安全性不佳，不利于疫苗的下游纯化工作以及人用流感疫苗的大规模开发和生产。

基于以上原因，有必要去开发一款化学组分完全明确、配制简单、安全性好、成本低的化学限定培养基，能够快速驯化MDCK贴壁细胞至单个悬浮生长且生长速率高，为基于MDCK细胞全悬浮培养的流感疫苗生产工艺提供良好的基础。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种培养基，其化学组分完全明确，能适用于全悬浮细胞培养。

本发明的另一个目的在于提供一种培养基，其化学组分完全明确，能适用于全悬浮细胞的高密度培养培养。

本发明的再一个目的在于提供一种培养基，利于将贴壁细胞驯化为单个悬浮细胞，提高细胞的培养效率。

本发明的又一个目的在于提供一种培养基，适用于对MDCK细胞实施全悬浮细胞培养，实现细胞的高密度培养。

本发明的第五个目的在于提供一种培养基，适用于采用MDCK细胞的疫苗制取。

一种培养基，包括如下组分：

第一类营养物，用于满足细胞的基础代谢，包括：但不限于

2000～10000mg/L D-葡萄糖、40～600 mg/L丙酮酸钠、5～30mg/L L-丙氨酸、L-精氨酸 100～600 mg/L、5～60 mg/L L-天冬酰胺、5～60 mg/L L-天冬氨酸、5～80 mg/L L-胱氨酸、10～150mg/L L-半胱氨酸、5～60mg/L L-谷氨酸、300～1500mg/L L-谷氨酰胺、5～100mg/L甘氨酸、10～150mg/L L-组氨酸；20～150mg/L L-异亮氨酸、40～250mg/L L-亮氨酸、40～150mg/L L-赖氨酸、10～150mg/L L-甲硫氨酸、10～250mg/L L-苯丙氨酸、10～200mg/L L-脯氨酸、40～150mg/L L-丝氨酸、40～200mg/L L-苏氨酸、10～100mg/L L-色氨酸、10～100 mg/L L-酪氨酸和40～200mg/L L-缬氨酸；

第二类营养物，系核苷酸，包括：