[发明专利]小反刍兽疫病毒基因工程亚单位疫苗

说明书

本发明公开了一种小反刍兽疫病毒基因工程亚单位疫苗，其包含编码基因序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示的融合蛋白。本发明通过将小反刍兽疫病毒（PPRV）的H、F蛋白改造后连接，获得融合蛋白（PPRV‑Fu），并以该PPRV‑Fu蛋白制备小反刍兽疫病毒基因工程亚单位疫苗，所获疫苗的抗原性、免疫原性和功能与天然蛋白质相似，表达水平较高，免疫原性强，只需要很少量就能提供很好的免疫效果，对免疫后的动物没有致病性，同时本发明利用CHO细胞等表达该PPRV‑Fu蛋白，不仅表达量高，而且还可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，大大降低了疫苗生产成本。

技术领域

本发明涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种小反刍兽疫病毒基因工程亚单位疫苗，其制备方法与应用，属于动物免疫药物技术领域。

背景技术

小反刍兽疫（Peste des petits ruminants，PPR）俗称羊瘟，又被称为小反刍兽假性牛瘟，是由小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的一种急性、热性和高度传染性的传染病，主要危害山羊、绵羊和羚羊等小反刍动物，同时一些野生动物如骆驼和水牛也易感，也有动物实验中感染白尾鹿和猪的报道（Abubakar M, ArshedMJ, Zahur AB, Ali Q, Banyard AC. Natural infection with peste des petitsruminants virus: a pre and post vaccinal assessment following an outbreakscenario[J]. Virus Res. 2012;167(1):43-7.）。该病主要侵害淋巴组织和消化道、呼吸道上皮细胞，临床上以发热、眼鼻口炎、腹泻、肺炎为主要特征。PPR爆发时发病率可达60％以上，病死率可达50％，严重时病死率可达100％。PPR给流行国家和地区的畜牧业造成了毁灭性的打击，造成了农场主和牧民严重的经济损失。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报备A类烈性动物传染病，我国农业部将其列为一类动物疫病，是《国家动物疫病中长期防治规划（2012-2020年）》明确规定重点防范的外来动物疫病之一。

PPRV是一种单链RNA病毒，为副黏病毒科麻疹病毒属成员，成熟的PPRV通常为球形或椭球形，直径400-500nm。PPRV的基因组全长为15948bp，基因组从 3’端至 5’端依次编码八种蛋白，六种结构蛋白之间通过序列间隔，即衣壳蛋白（N）、磷蛋白（P）、膜基质蛋白（M）、融合蛋白（F）、血凝素（H）、大蛋白（L）；其中P基因转录单位除P蛋白外，还编码C和V两个非结构蛋白（Diallo A: Morbillivirus group: Genome organisation and proteins.Veterinary microbiology 1990; 23:155-163.）。H蛋白负责与细胞表面受体连接，调节病毒吸附并渗入宿主细胞。H蛋白含有抗原表位，刺激机体产生中和抗体，参与体液保护性免疫应答，是病毒的主要抗原成分，也是引起宿主细胞病变的决定性因素（Sinnathamby G,Renukaradhya GJ, Rajasekhar M, Nayak R, Shaila MS: Immune responses in goatsto recombinant hemagglutinin-neuraminidase glycoprotein of peste des petitsruminants virus: Identification of a t cell determinant. Vaccine 2001; 19:4816-4823.）。F蛋白是C末端锚定在细胞膜上的糖蛋白，属于I型糖蛋白，能够诱导产生细胞溶血素，并使细胞融合，与H蛋白共同作用，启动病毒感染细胞，诱发机体产生保护性免疫应答（Wild TF, Malvoisin E, Buckland R: Measles virus: Both the haemagglutininand fusion glycoproteins are required for fusion. The Journal of generalvirology 1991; 72(Pt 2): 439-442.）。