[发明专利]一种动物肺芽类器官培养基及培养方法

权利要求书

1.一种动物肺芽类器官培养基，其特征在于：由基础培养基SAGM、无菌水和功能组分组成，所述功能组分在该类器官培养基中的终浓度组成为：B27，0.5-2×；HGF，10-50ng/ml；BMP7，2-20ng/ml；EGF，20-200ng/ml；KGF，2-20ng/ml；FGF4，100-400ng/ml；SB216763，1-20μM；tretinoin，10-100nM；Wnt-3A，20-200ng/ml；Prostaglandin E2，0.1-1μM；Insulin-Transferrin-Se，0.5-2×；HEPES，5-20mM；青霉素，100U/ml；链霉素，0.1mg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种通用型肺芽类器官培养基，其特征在于：所述功能组分在该类器官培养基中的终浓度组成为：B27，0.8-1.2×；HGF，30-50ng/ml； BMP7，2-10ng/ml；EGF，100-200ng/ml；KGF，2-10ng/ml；FGF4，200-400ng/ml；SB216763，10-20μM；tretinoin，10-50nM；Wnt-3A，100-200ng/ml；Prostaglandin E2，0.1-0.5μM；Insulin-Transferrin-Se，0.8-1.2×；HEPES，5-10mM；青霉素，100U/ml；链霉素，0.1mg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种通用型肺芽类器官培养基，其特征在于：所述培养基的制备方法为：将各组分先用无菌水配制成混合母液，然后加入SAGM培养液。

4.一种动物肺芽类器官的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）将清洗后的肺组织于低温下剪碎；

2）加入胶原酶重悬剪碎的肺组织进行消化，之后离心去除上清；

3）用HBSS重悬沉淀，40μm细胞筛网过滤消化后的组织悬液，离心；

4）用SAGM培养液重悬细胞沉淀，并用等体积的matrigel胶混合，接种，于37°C、5%CO₂条件下放置30~50min，待胶凝固后，加入权利要求1~3任意一项所述的培养基，培养7~14天，得到肺芽类器官。