[发明专利]改性腐植酸钠和制备方法及应用

说明书

一种改性腐植酸钠和制备方法及应用，获得具有明显小肠炎症的肠炎模型小鼠，主要包括昆明小鼠饮用含3‑4%葡聚糖硫酸钠蒸馏水3‑5天，以后的13‑15天昆明小鼠饮用0.3‑0.5%改性腐植酸钠水溶液与10⁸cfu/mL大肠杆菌K88菌液，隔天交替，肠炎模型建立及治疗过程共计18天；其次，通过控制腐植酸钠改性工艺，获得具有特定酚羟基与羧基摩尔比的改性腐植酸钠，主要包括：称取腐植酸质量含量45%的腐殖酸矿粉100g，氢氧化钠6‑12g，硫代硫酸钠3‑6g，加入1000g蒸馏水，60‑130转/分钟搅拌，80‑120℃反应60‑120分钟，4200转/分钟离心10分钟；上清液置于不锈钢托盘中，80‑180℃烘箱中干燥至恒重，获得改性腐植酸钠制品。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其是涉及一种改性腐植酸钠和制备方法及应用。

背景技术

大肠杆菌性腹泻是畜牧业中常见的发病率、死亡率极高的传染病之一。虽然抗生素已普遍用于此病的治疗，但是长期使用会导致细菌产生耐药性。因此，建立肠炎模型有助于研究其发病机制及新药开发。由于大肠杆菌K88为条件致病菌，因此在以大肠杆菌K88进行的模型建立过程中，经常会出现肠炎症状不明显等问题。葡聚糖硫酸钠是建立肠炎模型的常用化学物质，主要用于结肠炎模型的建立。现有技术中多采用腹腔注射、鼻腔给药或高浓度菌液经口灌服建立肠炎模型，有研究表明单独使用大肠杆菌K88建模，肠炎现象不明显。

发明内容

本发明为了克服现有技术中的不足，采用大肠杆菌K88联合葡聚糖硫酸钠建立肠炎模型，并采用自由饮水的方式建模，更准确的模拟大肠杆菌性腹泻的感染途径及特点，得到了腐植酸钠对大肠杆菌K88与葡聚糖硫酸钠联合诱导的肠炎小鼠影响模型的建立方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种改性腐植酸钠，其中的酚羟基与羧基摩尔比为2-2.2。

改性腐植酸钠的制备方法，它包括如下步骤：

（1）称取腐植酸质量含量45%的腐植酸矿粉100g，氢氧化钠6-12g，硫代硫酸钠3-6g，加入1000g蒸馏水，60-130转/分钟搅拌，80-120℃反应60-120分钟，4200转/分钟离心10分钟，取上清液。

（2）上清液置于不锈钢托盘中，80-180℃烘箱中干燥至恒重，获得改性腐植酸钠制品。

一种改性腐植酸钠的应用，其特征是用于小鼠大肠杆菌K88肠炎模型建立。

用于小鼠大肠杆菌K88肠炎模型建立包括如下步骤：（1）昆明小鼠饮用含3-4% 葡聚糖硫酸钠蒸馏水3-5天，以后的13-15天昆明小鼠饮用0.3-0.5%改性腐植酸钠水溶液与10⁸cfu/mL大肠杆菌K88菌液，隔天交替；小鼠大肠杆菌K88肠炎模型建立过程共计18天。

改性腐植酸钠的制备方法包括如下步骤：

（1）称取腐植酸质量含量45%的腐植酸矿粉100g，氢氧化钠6-12g，硫代硫酸钠3-6g，加入1000g蒸馏水，60-130转/分钟搅拌，80-120℃反应60-120分钟，4200转/分钟离心10分钟，取上清液。

（2）上清液置于不锈钢托盘中，80-180℃烘箱中干燥至恒重，获得改性腐植酸钠制品。

小鼠肠炎症状评价：

（1）每天记录小鼠大便的性状及腹泻率；每2天称量小鼠的体重变化，计算小鼠疾病活动指数（DAI）。

（2）试验结束后解剖小鼠，结合小鼠疾病活动指数，通过小鼠结肠长度、肠绒毛及肠壁完整性、肠道菌群结构比较，评价模型小鼠是否具有典型的大肠杆菌性肠炎特征以及腐植酸钠对肠炎模型小鼠的治疗效果。

本发明具有如下有益效果：