[发明专利]一种软枣猕猴桃苗木品种鉴定的方法

说明书

本方法提供了一种软枣猕猴桃苗木品种鉴定的方法，涉及品种鉴定技术领域。本发明采用SSR标记结合毛细管电泳技术，建立了基于2对SSR引物标记的软枣猕猴桃品种鉴定方法。本发明所述方法利用已有品种的扩增数据，与未知品种进行数据比对，从而为未知品种的早期品种鉴定提供了一种重复性好、位点特异性强、扩增条带数字化，并且通用、便捷、有效的方法。

技术领域

本发明属于品种鉴定技术领域，具体涉及一种软枣猕猴桃苗木品种鉴定的方法。

背景技术

软枣猕猴桃(Actinida arguta)为猕猴桃科(Actinidaceae)猕猴桃属(Actinida)多年生木质藤本植物，在东北地区属于具有地方特色的林下资源，目前以其独特的风味和丰富的营养深受消费者喜爱，发展前景广阔。随着国内外引种工作的开展，栽培品种区域化格局逐渐形成，苗木市场逐渐变大，但由于目前品种繁多，存在“同名异物”、“同物异名”现象。传统品种划分主要依据其形态学特征、生物学特征和经济性状为主要依据，这种品种鉴定方法难以在早期准确地鉴定品种，生产上因伪劣品种或品种混杂造成损失的现象时有发生。因此在苗期准确鉴别品种显得较为重要和迫切，同时对新品种的审定、注册、保护和管理，建立快速、准确、可靠的品种特异性检测方法，具有较高的实践价值。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种软枣猕猴桃苗木品种鉴定的方法，可数字化表征不同品种性状，从而快速鉴定软枣猕猴桃苗木品种，具有通用、便捷和有效的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种软枣猕猴桃苗木品种鉴定的方法，包括以下步骤：以软枣猕猴桃苗木基因组DNA为模板，利用引物对UDK-104和/或UDK-099进行扩增，将扩增产物进行毛细管电泳，依据电泳结果，判断软枣猕猴桃苗木品种；

所述引物对UDK-104包括UDK-104-F和UDK-104-R，所述UDK104-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述UDK-104-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述引物对UDK-099包括UDK-099-F和UDK-099-R，所述UDK-099-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述UDK-099-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

优选的，所述软枣猕猴桃苗木基因组DNA提取自落叶期的软枣猕猴桃芽。

优选的，所述引物对UDK-104的扩增片段内TG重复单元数为9，CA或TG重复单元数为13，TC或AC重复单元数为11；所述引物对UDK-099的扩增片段内TG重复单元数为19。

优选的，所述扩增的PCR体系以10μL计，包括：ddH₂O 3.0μL，2×Taq master mix 5μL，20ng模板DNA1.0μL，20μM正向引物和20μM反向引物各0.5μL。

优选的，所述扩增的PCR程序包括：94℃预变性5min；94℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃延伸10min。

本方法提供了一种软枣猕猴桃苗木品种鉴定的方法，采用SSR标记结合毛细管电泳技术，建立了基于2对SSR标记的软枣猕猴桃品种鉴定方法。本发明实施例首次建立了目前国内外的15个软枣猕猴桃品种的SSR扩增数据，为未知品种的鉴定提供了可比对的数据结果，为软枣猕猴桃的早期品种鉴定提供了一种重复性好、位点特异性强、扩增条带数字化，并且通用、便捷、有效的方法。

附图说明

图1为UDK-099在‘龙成2号’上的扩增结果；

图2为UDK-104在‘龙成2号’上的扩增结果图。

具体实施方式