[发明专利]RNASEH2A抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用

说明书

本发明公开了RNASEH2A抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用，属于基因工程药物领域。本发明先通过TCGA和Oncomine数据库，qRT‑PCR和免疫组化实验，证实了RNASEH2A在肝癌中高表达，并与差预后呈正相关；之后，设计了三对RNASEH2A gRNA，合成相应的寡核苷酸，连接到epiCRISPR载体中，构建表达gRNA和cas9蛋白的表达载体，将载体用于细胞增殖实验，证实RNASEH2A gRNA可通过抑制RNASEH2A从而抑制肝癌细胞增殖。

技术领域

本发明属于基因工程药物技术领域，具体涉及RNASEH2A抑制剂在制备治疗或预防肝癌药物中的应用。

背景技术

RNASEH2A(Ribonucleases H,type 2,subunit A)，是一种核酸内切酶。最近的研究显示RNASEH2A参与了多种肿瘤的致病过程，可望成为癌症的治疗靶点。例如Dai等报道RNSESH2A通过改变细胞的增殖和凋亡参与了人胶质瘤发展；RNASEH2A连同CDK1和CD151能够有效反映肾癌患者的预后。通过对GEO数据库的分析，Zhang等发现RNASEH2A在成对的癌和癌旁组织中具有显著的表达差异。此外，Flanagan等发现在转化的人成年间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)以及多种癌和肉瘤细胞细胞系中RNASEH2A表达增加，通过siRNA干扰RNASEH2A可抑制癌细胞的失巢性生长(anchorage-independent growth)。基因表达谱的研究发现肺腺癌中的RNASEH2A与其发生发展密切相关。

但是，还未有研究揭示RNASEH2A与肝癌的相关性。目前，原发性肝癌仍是我国高发的恶性肿瘤之一，因此，仍然需要去发掘肝癌发生新的早期生物标志物，或者有效的精准的治疗靶点，以提高肝癌患者的生存期和生存质量。

发明内容

本发明的目的是提供RNASEH2A抑制剂在制备治疗或预防肝癌药物中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术手段：

本发明先通过TCGA和Oncomine数据库，qRT-PCR和免疫组化实验，证实了RNASEH2A在肝癌中高表达，并与差预后呈正相关；之后，设计了三对RNASEH2A gRNA，合成相应的寡核苷酸，连接到epiCRISPR载体中，构建表达gRNA和cas9蛋白的表达载体，将载体用于细胞增殖实验，证实RNASEH2A gRNA可通过抑制RNASEH2A从而抑制肝癌细胞增殖。

本发明提供了RNASEH2A抑制剂对肝癌细胞增殖的抑制作用，从而证明了CD317抑制剂对肝癌的治疗作用。结果表明，SgRNASEH2A能够高效沉默肝癌细胞RNASEH2A的表达，从而抑制癌细胞增殖。

附图说明

图1为TCGA数据库分析RNASEH2A、RNASEH2B、RNASEH2C和RNASEH1表达及其预后分析。

图2为Oncomine数据库、人肝癌样本分析及细胞系中RNASEH2A表达情况。

图3为人肝癌样本中组织芯片免疫组化分析RNASEH2A表达情况及预后。

图4为SgRNASEH2A对肝癌细胞增殖能力的影响。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

通过TCGA和Oncomine数据库，qRT-PCR和免疫组化实验，证实RNASEH2A在肝癌中高表达，并与差预后呈正相关。