[发明专利]一种樟树分枝调控因子WRKY2/DIB1基因的应用

说明书

本发明公开了一种樟树分枝调控因子WRKY2/DIB1基因的应用，属于植物基因工程技术领域。本发明以樟树叶RNA为材料，采用RACE基因全长克隆的方法，获得樟树分枝调控因子DIB1基因的全长序列，如SEQ ID NO.1所示。DIB1基因编码WRKY转录因子WRKY2。采用Gateway克隆技术构建植物过量表达载体pBI12l‑DIB1，利用农杆菌介导法将pBI121‑DIB1转入受体材料杨树中，过量表达DIB1的转基因杨树植株茎尖表现出分枝现象。因此本发明提供的调控因子，可以参与植物顶端发育调控，可以在植物基因工程中，改良植物的株型，改良品种选育进程。

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种樟树分枝调控因子WRKY2/DIB1基因的应用。

背景技术

樟树(Cinnamomum camphora)，又名香樟，樟科樟属常绿大乔木，是热带亚热带常绿阔叶林的重要组成树种之一，对亚热带常绿阔叶林的结构功能维护及生物多样性保护起着重要作用。樟树根、茎、叶、花、果中均富含精油，具有重要的开发利用价值。是医药、日用化工、食品、国防和香精香料等工业的重要原料。樟树以其常绿、枝叶繁茂、冠形美观而被很多地方作为优良的庭院、街道、公园、公路等风景区的园林绿化树种。

植物的分枝发育是一个复杂的生物学过程，受到遗传、激素、环境和营养等多种因素的调控，在植物的形态建成中具有重要的意义。在禾本科植物中例如水稻和玉米，分蘖数的多少与作物的产量有着直接的关系；在木本植物中，植物的分枝发育在林木的株型发育和形态建成中具有重要的作用。先前的研究已经表明，植物激素在植物的分枝发育过程中起着重要的作用，植物通过生长素、独脚金内酯和细胞分裂素的共同作用控制分枝发育。

转录因子(Transcription factor，TF)是一类可以调控基因表达的反式作用因子。相对于功能基因而言，单个转录因子往往可以同时调控多个功能基因的表达。因此，分析和鉴定转录因子的基因功能就显得非常有意义了。通过转基因技术，将可以同时调控多个功能基因的转录因子转化植物有望实现快速培育综合性状优良的新品种。

WRKY是植物特有的一类转录因子超家族，因其N-端含有7个高度保守的WRKYGQK氨基酸残基而得名。WRKY蛋白通过与靶基因启动子区域的顺式作用元件(T)(T)TGAC(C/T)(W-box)特异地结合来调节靶基因的表达。目前研究认为，WRKY转录因子家族成员广泛参与植物生物和非生物胁迫响应，在植物生长发育、生理、代谢过程中起着重要的调控作用。拟南芥AtWRKY71转录因子(EXB1)过量表达可以正向调控拟南芥分枝，使其分枝数大大增加，与其同源的转录因子WRKY23也可以调控分枝发育，它们功能相似。目前关于植物分枝的研究主要在于促进腋芽分枝生长发育，而有关顶芽分枝或二叉分枝方面的研究还鲜有报道。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种樟树分枝调控因子DIB1(DICHOTOMOUS BRANCHING1)基因的应用。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种樟树分枝调控因子DIB1基因在促进植株顶端分枝中的应用，所述的樟树分枝调控因子DIB1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的应用，包括以下步骤：

1)构建樟树分枝调控因子DIB1基因的载体；

2)将所构建的樟树分枝调控因子DIB1基因的载体转化到植物或植物细胞中；

3)培育筛选得到顶端分枝的转基因植物。

所述樟树分枝调控因子DIB1基因的植物过表达载体为pBI12l-DIB1。

所述载体PBI121-DIB1，在DIB1基因的5′端组装组成型强表达启动子CaMV 35S，在DIB1基因的3′端组装强终止子NOST。