[发明专利]维持肝细胞活性的保存液

说明书

本发明的维持肝细胞活性的保存液，包括肝细胞基础保存液和一氧化氮纳米泡，一氧化氮纳米泡均匀地分散于肝细胞基础保存液中。肝细胞基础保存液肝细胞基础保存液包括羟乙基淀粉50mg/L、胆红素10mg/L、维生素C 200mg/L、成纤维细胞生长因子5mg/L、氯化钠2.0g/L、谷氨酸钠10.0g/L。一氧化氮纳米泡是由蛋黄磷脂为泡膜材料包裹一氧化氮气体形成的泡囊组成，在肝细胞基础保存液中的浓度为1×10⁶～5×10⁶个/mL。本发明的保存液用于肝细胞的体外保存。

技术领域

本发明涉及一种维持肝细胞活性的保存液，特别涉及一种维持肝细胞活性的体外保存溶液。

背景技术

肝细胞是肝病细胞治疗中的种子细胞。经国内外学者对肝细胞的生物学特性及功能的深入研究，发现肝细胞能够分解代谢许多物质，其功能与正常肝细胞功能特别相似，并且该细胞能够不断增殖，且不具有致癌性。这一发现为肝病患者的治疗和治愈带来了光明的前景。

但是肝细胞存活率及生物活性直接影响了其治疗效果。因此，如何维持肝细胞的高存活率及生物活性成为了肝病细胞治疗的关键。在此之前，人们用生理盐水或者葡萄糖溶液作为细胞的保存液，但是由于缺乏营养、溶液等张力或等渗透力的差异等原因，导致细胞在保存及运输过程中出现活力低下、大量溶胀死亡等现象，细胞的大量死亡及活性的降低会直接影响肝病的治疗效果。

此外上述保存液的成分复杂，制备过程繁琐，且并不是针对肝细胞的保存液，同时其保存效果也并未达到令人满意的效果。为了进一步的适应临床应用的需要，开发一种能在长时间保存和运输中，既能维持肝细胞的存活率及生物活性，又能在进入到肝病手术患者体内后缓解手术后可能出现的并发症的肝细胞保存液已经成为制约肝细胞治疗技术发展的瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于克服制约肝细胞治疗技术发展的瓶颈，提供一种维持肝细胞高活性的保存溶液，保证肝细胞的存活率及生物活性，同时满足临床肝细胞治疗的安全、有效、便捷、经济的要求。

本发明申请人发现，适宜浓度的一氧化氮气体对于肝细胞的存活率及生物活性具有显著的作用，但这种作用受到多方面因素的影响，尤其是微环境，对于一氧化氮气体发挥肝细胞保护作用影响显著。但一氧化氮(NO)微溶于水，无法直接应用于肝细胞保存液中。已有报道的用于补充体内一氧化氮的方法多是应用一氧化氮供体化合物。一氧化氮供体化合物分为两类：非酶生型和酶生型。非酶生型一氧化氮供体化合物大部分来自硝基化合物，包括硝普盐、有机或无机亚硝酸盐和硝酸盐、亚硝胺、氮芥、联氨等，剂量小且毒副作用大。而酶生型一氧化氮供体化合物(如精氨酸)需要通过体内生物酶等作用分解产生出一氧化氮分子。以上这些一氧化氮供体化合物都无法直接应用于肝细胞保存液中。

本发明申请人通过大量实验，制备出维持肝细胞活性的保存液，该保存液包括肝细胞基础保存液和一氧化氮纳米泡，一氧化氮纳米泡均匀地分散于肝细胞基础保存液中。

上述的肝细胞基础保存液中包括：羟乙基淀粉50mg/L、10mg/L胆红素、200mg/L维生素C、5mg/L成纤维细胞生长因子、氯化钠2.0g/L、10g/L谷氨酸钠。

上述的肝细胞基础保存液中进一步加入：糖、电解质盐、抗凝剂、氨基酸、pH值缓冲剂、抗菌剂和抗氧化剂。

上述的一氧化氮纳米泡是由蛋黄磷脂为泡膜材料包裹一氧化氮气体形成的泡囊组成。

上述的一氧化氮纳米泡的粒径范围为500～900nm。

上述的一氧化氮纳米泡优选的粒径范围为600～800nm。

上述的一氧化氮纳米泡在肝细胞基础保存液中的浓度为1×10⁶～5×10⁶个/mL。

上述维持肝细胞活性的保存液的使用温度为0～37℃。