[发明专利]一种人胚胎干细胞培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种人胚胎干细胞培养基，其特征在于，包括如下组分及其重量百分数：BRL-3A条件培养基95.6～97.7％，尤加利精油0.2～0.4％，甘草根提取物0.3～0.5％，虎杖提取物0.2～0.4％，I型胶原1～2％，非必需氨基酸0.1～0.3％，碱性成纤维细胞生长因子0.5～0.8％。

2.如权利要求1所述的人胚胎干细胞培养基，其特征在于，由如下组分及其重量百分数组成：BRL-3A条件培养基96.6％，尤加利精油0.3％，甘草根提取物0.4％，虎杖提取物0.3％，I型胶原1.5％，非必需氨基酸0.2％，碱性成纤维细胞生长因子0.7％。

3.如权利要求1或2所述的人胚胎干细胞培养基，其特征在于，所述甘草根提取物的制备方法为：取甘草块根，干燥，粉碎，过200目筛，置于三倍体积的体积分数为75％的乙醇溶剂中提取2h，将提取液减压浓缩，然后纯化水洗涤2次，洗涤后的提取液再次进行减压浓缩，然后干燥，即得。

4.如权利要求1或2所述的人胚胎干细胞培养基，其特征在于，所述虎杖提取物的制备方法为：取虎杖饮片，粉碎，过100目筛，用3倍体积的体积分数为85％的乙醇于80℃下回流提取2次，每次2h，合并滤液，减压浓缩至无乙醇味，用乙酸乙酯萃取，减压回收得二苯乙烯类；将水层酸水解后经乙醚采用索氏法提取至无色，醚层经质量分数为5％的氢氧化钠溶液萃取，酸化后得到蒽醌类；将二苯乙烯类与蒽醌类混合，即得。

5.如权利要求1或2所述的人胚胎干细胞培养基，其特征在于，所述非必需氨基酸由丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸按质量比3～5：1～2：7～8：5～7组成。

6.一种如权利要求1-5任一项所述人胚胎干细胞培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将BRL-3A条件培养基加热至40～45℃，然后向其中加入甘草根提取物及虎杖提取物，混合均匀，得混合物I；

S2、保持40～45℃的温度，向步骤S1所得混合物I中加入尤加利精油，混合搅拌均匀，得混合物II；

S3、将步骤S2所得混合物II降温至20～25℃，加入I型胶原，非必需氨基酸，碱性成纤维细胞生长因子，混合均匀，即得。

7.如权利要求6所述人胚胎干细胞培养基的制备方法，其特征在于，步骤S1所述混合均匀的条件为于200～300rpm的转速下，搅拌10～15min。

8.如权利要求6所述人胚胎干细胞培养基的制备方法，其特征在于，步骤S2所述混合搅拌均匀的条件为于300～400rpm的转速下，搅拌20～25min。

9.如权利要求6所述人胚胎干细胞培养基的制备方法，其特征在于，步骤S3所述混合均匀的条件为于250～350rpm的转速下搅拌30～40min。