[发明专利]无血清悬浮适应的MDCK细胞及其在制备流感病毒疫苗中的应用

说明书

本发明提供了一种无血清悬浮适应的MDCK细胞及其在制备流感病毒疫苗中的应用。本发明的无血清悬浮适应的MDCK细胞能够实现流感病毒高滴度扩增、适合工业化生产。

技术领域

本发明属于病毒学和生物药物领域。具体涉及一种无血清悬浮适应的MDCK细胞及其在制备流感病毒疫苗中的应用。

背景技术

流感是由流行性感冒病毒(简称“流感病毒”)引起的一种发病急、传染性强、传播速度快的呼吸道传染病。据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)新近统计数据，每年流感的季节性流行在全球可导致300万-500万例重症病例、29万-65万例死亡病例。时而发生的流感大流行(如2009年甲型H1N1流感大流行)和人感染H5N1、H9N2、H7N9、H5N6等禽流感疫情也给人类健康带来巨大危害和潜在威胁。

接种疫苗是预防流感最有效的手段。70多年来，基于传统鸡胚培养的流感疫苗在流感防控中发挥了积极作用，但存在潜在的不足，如疫苗生产必须依赖于大量符合质量标准的鸡胚的有计划供应、疫苗生产工艺劳动强度较大，难以全面实现自动化、疫苗病毒株较易发生鸡胚传代适应性变异、鸡胚潜在致病因子污染与残体无害化处理等问题；特别是在高致病性禽流感流行期间，可能会因鸡胚供应问题导致疫苗制备原料缺乏，疫苗供应存在极大的隐患。以上潜在不足也是限制流感疫苗产能扩大、质量提升和应急生产能力提高的瓶颈。

WHO建议流感疫苗生产企业使用哺乳动物细胞培养来替代鸡胚培养以进行流感疫苗生产。相对于鸡胚培养，基于细胞培养的流感疫苗的优势主要体现在：摆脱了对鸡胚供应的依赖；工艺易于自动化、规模化；疫苗病毒株在细胞中传代突变几率低，疫苗抗原性更接近自然流行株；工艺采用相对密闭的生物反应器系统，可有效降低微生物污染风险；疫苗不含卵清蛋白，可降低接种后过敏反应风险。

值得注意的是，在2017-2018南半球流感流行季，细胞基质流感疫苗比鸡胚流感疫苗在不同人群(尤其是老年人群)中表现出更高的保护效率。初步分析表明，H3N2流感病毒在鸡胚中的传代适应性突变可能导致了其与流行株抗原性的差异，从而造成鸡胚疫苗接种人体后产生的抗体中和流行病毒株能力下降，细胞基质流感疫苗引起了疫苗审评与监管部门的高度重视。

近年来，基于不同类型细胞基质的季节性流感疫苗和大流行流感疫苗已在不同国家和地区获批上市，为流感流行和大流行的有效防控提供了重要支持。

所以，本领域急需提供能够实现流感病毒高滴度扩增、适合工业化生产流感疫苗的细胞基质。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够实现流感病毒高滴度扩增、适合工业化生产流感疫苗的细胞基质。

本发明第一方面，提供了一种无血清悬浮适应的犬肾传代(Madin Darby caninekidney，MDCK)细胞，所述细胞是保藏号为CCTCC NO:C2019193的细胞。

在另一优选例中，所述细胞具有一个或多个选自下组的特征：

(1)所述细胞能够在无血清培养基中存活和稳定传代；

(2)所述细胞在培养基中能够以单细胞形式悬浮培养。

在另一优选例中，所述细胞能够在无血清、无动物源培养基中培养。

在另一优选例中，所述培养基为不含血清、生长因子、细胞因子或动物源性成分的培养基。

在另一优选例中，所述细胞能够表达流感病毒受体唾液酸α2,6-半乳糖(SAα2,6-gal)和/或禽流感病毒受体唾液酸α2,3-半乳糖(SAα,2,3-gal)。

在另一优选例中，所述无血清悬浮适应的MDCK细胞的无菌、支原体和外源病毒污染检查均为阴性，符合中华人民共和国药典的规定。

本发明第二方面，提供了如本发明第一方面所述的细胞的用途，用于培养流感病毒。