[发明专利]CD29抗体在鉴定、分选人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞中的应用

说明书

本发明公开了CD29在鉴定、分选人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞中的应用方法。本发明中的应用方法是先分别用多种细胞表面标志物标记人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)，然后用流式细胞仪进行检测，考察各标记物标记后流式检测的合格率以及稳定性，发现通用标准中的标记物CD90表达不稳定，而CD29标记PMSCs后检测均合格，并且经过重复试验发现，CD29具有良好的检测稳定性，检测合格率100％，表明CD29对PMSCs具有良好且稳定的鉴定效果，可替代CD90用于PMSCs的快速、准确鉴定。

技术领域

本发明属于间充质干细胞鉴定技术领域。

背景技术

在生物医学的基础研究或者临床研究中，分析某一个特定细胞群的细胞数量和功能变化的时候，都需要将这群细胞与其他细胞分开，这时就需要根据不同的细胞表面标志物将其分开。细胞表面标志物是指镶嵌在细胞膜脂质双层结构中的膜蛋白，包括膜抗原、膜受体及其他分子，CD分子(Cluster of Differentiation，分化簇或分化群，也叫白细胞分化抗原)是最常用的细胞表面标志物之一，指应用以单克隆抗体鉴定为主的方法，将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原，包括细胞的特定形态、特定功能和发育阶段。

2006年，国际细胞治疗协会(ISCT)规范了间充质干细胞的定义。只有同时符合以下三个标准的细胞，才能称之为间充质干细胞(主要是骨髓来源的间充质干细胞)：

①贴壁生长；

②细胞表面表达一些特异性抗原(标记物)：

阳性(≥95％)：CD90、CD105、CD73，

阴性(≤2％)：CD45、CD34、CD11b/CD14、CD19/CD79、HLA-DR；

③具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的能力。

实际实验室操作中，通过组织贴壁培养法培养出的人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)，观察贴壁生长的干细胞形态正常，检测的除CD90外其他细胞表面标志物的结果正常，用相应试剂盒评价其向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的能力正常，结果唯独显示，CD90表面标志物稳定性较差，合格率仅为26.19％(统计份数42份)，即按照国际细胞治疗协会(ISCT)公开的标准并不能有效鉴定出合格的人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)。并且相关文献的实验结果也指出，人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞表面标志物CD90的阳性表达量大概率出现阳性表达不足95％的情况。这给鉴定、分选合格的人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)带来了困难，也是进一步研究人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)功能的障碍。因此，筛选出一种在PMSCs细胞表面高表达且表达稳定性强的细胞表面标志物，可用于准确鉴定、分选合格的人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)，作为合格的人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞PMSCs的鉴定标准，具有十分重要的意义。

发明内容

本发明筛选出一种在人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)细胞表面高表达且表达稳定性强的细胞表面标志物，可替代CD90用于准确鉴定、分选合格的人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)，作为合格的人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞PMSCs的鉴定指标之一。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：分别用多种细胞表面标志物标记人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞(PMSCs)，然后用流式细胞仪进行检测，考察各标记物标记后流式检测的合格率以及稳定性，最终发现CD29标记PMSCs后检测均合格，并且经过重复试验发现，与CD90相比CD29具有良好的检测稳定性，检测合格率100％，表明CD29对PMSCs具有良好且稳定的鉴定效果，可替代CD90用于PMSCs的快速、准确鉴定。