[发明专利]一株产抗菌肽的海洋芽孢杆菌及其发酵方法和应用

说明书

本发明公开了一株产抗菌肽的海洋芽孢杆菌及其发酵方法和应用，该海洋芽孢杆菌是从采自于威海市南海新区某养殖池的底泥样品中分离、纯化得到的枯草芽孢杆菌M252，其对溶藻弧菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌和大肠杆菌均具有明显的抑制效果，保藏编号为CCTCC NO：M 2020057，该枯草芽孢杆菌M252通过液体发酵和固体发酵可以制备得到固液粉三种不同使用状态的抗菌肽制品，发酵制品多元化，可应用至水产养殖、动物饲料、作物肥料等不同领域，另外，该枯草芽孢杆菌M252在发酵过程中所用到的培养基成分均来源于成本较低的原料，在保证了发酵效率的同时降低了发酵成本，更适应于工业化生产应用。

技术领域

本发明涉及一株菌株及其发酵方法和应用，具体涉及一株产抗菌肽的海洋芽孢杆菌及其发酵方法和应用，属于微生物技术领域。

背景技术

在抗击致病菌的战争中，抗生素一直是人类所掌握的最重要的武器。但随着抗生素在医疗、饲料添加剂等方面的大量使用，使得许多致病菌进化出多种机制得以在诸多抗生素中存活，抗生素耐药性也成为当今社会面临的最严峻挑战之一。耐药性和药物残留问题日益严重，影响着人类健康。因此，寻找抗生素的替代物十分紧迫。

筛选可以有效抵抗病原体的化学物质一直是生命科学领域研究的热点。抗菌肽又叫宿主防御肽，通常是由7-100个氨基酸组成的小分子多肽，是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分，也是各种生物抵御入侵病原体的第一道防线，作为一种可从自然来源中提取并用于对抗抗生素耐药细菌的潜在候选物，已引起了广泛关注。抗菌肽具有广谱抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗原虫、甚至抗肿瘤细胞等活性，另外抗菌肽还表现出了促进机体组织愈合及调节体内免疫系统等活性。

以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）等为代表的大多数芽孢杆菌生长迅速、营养要求简单、抗逆性强，均可产生多肽类抗菌素以及具有溶菌作用的酶类。作为自然界中广泛存在的非致病菌，绝大多数芽孢杆菌对人畜无害且不会造成环境污染。因此，芽孢杆菌及其抗菌肽等代谢产物是控制病原菌病害最为安全有效和最具应用前景的天然生物制剂。

在现有技术中，通过陆源芽孢杆菌产抗菌肽的应用较为普遍。综合考虑生产成本与作用效果，将产抗菌肽微生物及其代谢产物直接固载制成微生物菌剂的应用越来越多。在海洋水产品养殖中应用各种抗菌肽，可以提高水产动物的生产性能、消化酶活性、抗氧化和免疫功能，但在应用微生物菌剂时则需考虑海水环境的特殊性。所以，选育一株产抗菌肽的海洋微生物，通过发酵获得抗菌肽或制备微生物菌剂并进行应用，研究开发安全无毒、无耐药性、高效的饲用抗生素替代品，是水产养殖和畜牧养殖饲料生产的关键环节，更是控制食品质量安全的源头。

发明内容

本发明的目的在于：考虑在海洋水产品养殖中海水环境的特殊性，筛选一株产抗菌肽的海洋微生物，并提供该产抗菌肽的海洋微生物的发酵方法，同时提供一种针对由上述产抗菌肽的海洋微生物发酵制成的微生物菌剂的应用方法。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一株产抗菌肽的海洋芽孢杆菌，其特征在于，该海洋芽孢杆菌是从采自于威海市南海新区某养殖池的底泥样品中分离、纯化得到的枯草芽孢杆菌M252，其对溶藻弧菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌和大肠杆菌均具有明显的抑制效果，保藏编号为CCTCC NO：M2020057，保藏日期为2020 年03月24日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉。

前述的产抗菌肽的海洋芽孢杆菌的第一种发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将枯草芽孢杆菌M252纯化后接入一级种子罐中，一级种子罐中的培养基的配方为：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠1g/L、用净化的海水配制，35℃、200rpm培养40h，得一级种子液；