[发明专利]一种绒山羊毛乳头细胞的分离、鉴定方法

权利要求书

1.一种绒山羊毛乳头细胞的鉴定方法，其特征在于：使用SOX₂⁺、FGF₇⁺、APOD⁺、HHIP⁺作为毛乳头细胞的标记基因；所述鉴定方法为：将待鉴定细胞经免疫荧光染色，判断标记基因转录蛋白的表达情况，能够表达所述标记基因的为所需绒山羊毛乳头细胞。

2.根据权利要求1所述的绒山羊毛乳头细胞的鉴定方法，其特征在于：将所述待鉴定细胞分离出来的方法包括如下步骤：

（1）无菌分离绒山羊皮肤组织；

（2）联合使用机械分离法和酶消化法，从步骤（1）的皮肤组织上分离绒山羊完整毛乳头细胞所在区域，获得相互分离的毛乳头细胞；

（3）获得相互分离的毛乳头细胞后，进行贴壁组织培养，培养所得细胞即为待鉴定细胞。

3.根据权利要求2所述的绒山羊毛乳头细胞的鉴定方法，其特征在于：步骤（1）所述皮肤组织的获得方法为：获取绒山羊肩胛部背侧皮肤组织，去除皮肤组织上残留的血渍和杂质，用含青霉素和链霉素的DMEM/F12培养基刷洗皮肤组织，随后沿毛囊的生长方向将皮肤组织切为长条状。

4.根据权利要求3所述的绒山羊毛乳头细胞的鉴定方法，其特征在于：步骤（2）所述分离绒山羊完整毛乳头细胞所在区域的方法为：将每条皮肤组织置入胶原酶中，于37℃恒温消化30min，将初步消化的皮肤组织转置于胰酶溶液中继续消化30min，消化至可通过体视镜观察到明显毛囊簇结构；

随后在体视镜下，将皮肤组织中的毛囊簇分离，为单根毛囊。

5.根据权利要求4所述的绒山羊毛乳头细胞的鉴定方法，其特征在于：获得单根毛囊后，在体视镜下，使用注射器针头切下毛囊终端膨胀部分，通过挤压将梭形毛乳头细胞团分离出来。

6.根据权利要求2所述的绒山羊毛乳头细胞的鉴定方法，其特征在于：步骤（3）所述培养的方法为：将毛乳头细胞团置于培养基中，于5%的CO₂培养箱中37℃恒温培养。

7. 根据权利要求6所述的绒山羊毛乳头细胞的鉴定方法，其特征在于：所述培养基为：10% FBS+DMEM/F12+bFGF+EGF。