[发明专利]一种定量检测新型冠状病毒拷贝数的试剂盒

权利要求书

1.含有SARS-CoV-2和HCV基因片段的假病毒标准品用于制备定量检测新型冠状病毒拷贝数试剂盒的用途，其特征在于，所述假病毒标准品的基因含有由SARS-CoV-2的ORF1ab和N保守区以及HCV保守区基因序列串联并合成的目标基因CoV/HCV RNA；其中ORF1ab保守区基因序列如Seq ID NO.7所示，N保守区基因序列如Seq ID NO.8所示，HCV的保守区基因序列如Seq ID NO.9所示，CoV/HCV RNA的序列如序列表中Seq ID NO.10。

2.一种定量检测新型冠状病毒拷贝数的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括含有SARS-CoV-2和HCV基因片段的假病毒标准品；所述假病毒标准品的基因含有由SARS-CoV-2的ORF1ab和N保守区以及HCV保守区基因序列串联并合成的目标基因CoV/HCV RNA；其中ORF1ab保守区基因序列如Seq ID NO.7所示，N保守区基因序列如Seq ID NO.8所示，HCV的保守区基因序列如Seq ID NO.9所示，CoV/HCV RNA的序列如序列表中Seq ID NO.10。

3.一种定量检测新型冠状病毒拷贝数的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括两组引物和探针，所述两组引物和探针分别为：

第一组

对应于ORF1ab基因的正向引物的序列如序列表中Seq ID NO.1所示；

对应于ORF1ab基因的反向引物的序列如序列表中Seq ID NO.2所示；

对应于ORF1ab基因的探针序列如序列表中Seq ID NO.3所示；

第二组

对应于N基因的正向引物的序列如序列表中Seq ID NO.4所示；

对应于N基因的反向引物的序列如序列表中Seq ID NO.5所示；

对应于N基因的探针序列如序列表中Seq ID NO.6所示；

所述试剂盒还包括含有SARS-CoV-2和HCV基因片段的假病毒标准品；

所述假病毒标准品的基因含有由SARS-CoV-2的ORF1ab和N保守区以及HCV保守区基因序列串联并合成的目标基因CoV/HCV RNA；其中ORF1ab保守区基因序列如Seq ID NO.7所示，N保守区基因序列如Seq ID NO.8所示，HCV的保守区基因序列如Seq ID NO.9所示，CoV/HCV RNA的序列如序列表中Seq ID NO.10。

4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述假病毒标准品的制备方法为：

1)将MS2噬菌体、SARS-CoV-2的ORF1ab和N保守区、HCV的保守区基因序列串联并合成目标基因MS2-CoV/HCV；

2)将MS2-CoV/HCV基因插入原核表达载体pET-28b中，构建pET-28b-MS2-CoV/HCV重组质粒；

3)将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞，提取质粒并双酶切鉴定，经IPTG诱导培养后经SDS-PAGE鉴定表达情况，纯化后得到CoV/HCV RNA；

其中，MS2-CoV/HCV、pET-28b-MS2-CoV/HCV的序列如序列表中Seq ID NO.11、Seq IDNO.12所示。

5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第三组内标引物和探针为：

对应于β-Globin基因正向引物的序列如序列表中Seq ID NO.13所示；

对应于β-Globin基因的反向引物的序列如序列表中Seq ID NO.14所示；

对应于β-Globin基因的探针序列如序列表中Seq ID NO.15所示；

所述的三组探针还包括荧光发生基因和荧光淬灭基因，其中对应于ORF1ab基因的探针的荧光发生基因为FAM，荧光淬灭基因为BHQ1；对应于N基因的探针的荧光发生基因为ROX，荧光淬灭基因为BHQ1；对应于β-Globin基因的探针的荧光发生基因为VIC，荧光淬灭基因为BHQ1。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括裂解液、清洗液、洗脱液、蛋白酶K、磁珠。